【摘 要】
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溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）是一类发生在结肠和直肠的非特异性炎症性疾病,表现为腹痛、腹泻和血便,易反复发作,难以完全治愈。目前,UC的病因尚不明确,但已知的是过度活化的促炎性细胞及其分泌的细胞因子能够引起UC的发生发展,且抑制过度活化的促炎性细胞,或增加具有抑炎作用的调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）有利于改善UC。白细胞介素35（Inter
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溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）是一类发生在结肠和直肠的非特异性炎症性疾病,表现为腹痛、腹泻和血便,易反复发作,难以完全治愈。目前,UC的病因尚不明确,但已知的是过度活化的促炎性细胞及其分泌的细胞因子能够引起UC的发生发展,且抑制过度活化的促炎性细胞,或增加具有抑炎作用的调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）有利于改善UC。白细胞介素35（Interleukin-35,IL-35）是一类抑炎性细胞因子,由Treg细胞所分泌,并具有促进Treg细胞分化、抑制炎症发展的作用。已有研究表明,注射IL-35能够改善UC,但注射给药存在成本高、操作不方便等问题,因此,开发口服递送IL-35的给药方式用于改善UC是十分必要的。乳酸菌作为肠道益生菌,是研究相对清楚的工程菌之一,利用基因修饰技术改造乳酸菌,使其表达生物活性分子,并研究其在预防或缓解疾病方面取得了阶段性进展,提示采用重组乳酸菌表达IL-35很可能缓解UC的发生发展,但目前并没有直接的实验证据。在本研究中,首先设计并合成小鼠IL-35目的基因片段,构建重组表达载体p NZ8148/IL-35,并制备相应的重组乳酸菌NZ9000/IL-35。其次,纯化所表达的重组IL-35,经体外实验确证其具有促进Treg细胞分化的作用,当采用0.5、1、2 ng/m L的重组IL-35时,Treg细胞分化比例分别为44.9%、65.8%和65.1%。再次,以健康小鼠为受试对象,发现口服重组乳酸菌NZ9000/IL-35后促进小鼠肠道IL-35的积累,口服第7、14、21天,肠道IL-35的水平分别为79.06±38.64、115.52±41.74和119.08±54.58 pg/mg。最后,采用葡聚糖硫酸钠（Dextran sodium sulfate,DSS）诱导小鼠实验性结肠炎模型,发现预防性口服重组乳酸菌NZ9000/IL-35有效缓解了模型小鼠的体重减轻、结肠长度缩短、疾病活动分数增加以及结肠组织病理变化,表明重组乳酸菌NZ9000/IL-35能够有效改善小鼠实验性结肠炎;进一步研究发现重组乳酸菌NZ9000/IL-35给药后,下调了小鼠肠道组织促炎性的辅助性T细胞17（T helper cell 17,Th17）水平,增加了抑炎性的Treg细胞水平,降低了肠道组织和血清中促炎性细胞因子白细胞介素6、白细胞介素17A、干扰素γ、肿瘤坏死因子α水平,上调了抑炎性细胞因子白细胞介素10水平。综上所述,本研究制备了一种表达鼠源IL-35的重组乳酸菌NZ9000/IL-35,并发现其具有改善小鼠实验性结肠炎的作用。研究成果为进一步探索预防和治疗UC的微生物制剂提供候选菌体材料,也为UC及其他炎症性疾病的治疗提供新的策略。
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