羽叶蛇葡萄提取物生物活性的研究

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目的:本课题研究羽叶蛇葡萄有机萃取物的体外抗氧化活性、对NIH型小白鼠急性中毒模型和慢性肝损伤模型的作用机制,并对羽叶蛇葡萄含有的成分做了专项试剂定性实验和对抗氧化性较好的提取物乙酸乙酯相的HPLC分析,另外,拓展了羽叶蛇葡萄的其它生物活性,研究其提取物的体外抗肿瘤、抗癌活性,为其保健功能评价、开发利用提供新的科学依据。  方法:1.实验提取出羽叶蛇葡萄的酒精总提取物,进一步将总提取物初步纯化,按极性大小选择四种有机溶剂通过分步萃取得到四种有机萃取相乙酸乙酯相、正丁醇相、石油醚相、水相;  2.检测以上所得总提取物及四种有机萃取相的体外抗氧化性,选择常用的抗氧化性评价药物阳性对照抗坏血酸(Vc)和丁基羟基甲苯(BHT),通过DPPH·、O2·和·OH自由基的清除能力、还原力、对Fe2+诱发的脂蛋白过氧化抑制能力以及总抗氧化性六种方法的测定和评价,对其体外抗氧化能力做一个比较客观综合的评估;  3.采用高浓度白酒一次性灌酒建立急性醉酒模型和长期灌酒建立酒精肝损伤模型,于造模期间分别给予四种有机萃取物进行一次和4周的干预,进行了防醉实验、解酒实验以及抗酒精性肝损伤实验研究,并进行了如下处理:(1)对小鼠进行了翻正反射实验和血醇浓度的测定;(2)分析长期小鼠体重变化、肝脏指数及各项肝脏生化指标ALT、AST、MDA、GSH、T-SOD、GSH-PX;(3)分别取每只小鼠的肝组织约3cm×3cm×5cm大小,10%中性甲醛溶液固定,24小时后常规石蜡包埋用于免疫组织化学染色;  4.运用特殊试剂定性实验检测羽叶蛇葡萄提取物的化学成分种类,并对由前面实验所得的具有良好抗氧化能力、解酒保肝作用的乙酸乙酯相做了初步的HPLC分析;  5.运用MTT法、细胞流式仪法及AnnexinⅤ-FITC双染色法分别检测羽叶蛇葡萄萃取相对人宫颈HeLa癌细胞的生长、细胞周期和细胞凋亡的作用。  结果:与模型组相比,药物干预组具有解酒和醒酒的作用,尤以乙酸乙酯相最佳,血清和肝组织中的ALT、AST活性显著降低,MDA含量显著降低,GSH含量显著升高,T-SOD、GSH-PX的活力显著提高,组织切片损伤程度也有所减轻;羽叶蛇葡萄乙酸乙酯相的成分包括生物碱、有机酸、酚类或鞣质、黄酮类、蒽醌类和甾体等,石油醚相含有机酸、香豆素或萜、挥发油或油脂等,正丁醇相含有生物碱、氨基酸类、大酚类或鞣质、黄酮类、甾体等,乙酸乙酯相HPLC分析其含有十二种单体化合物;乙酸乙酯相和正丁醇相都是很好的抗癌成分,尤其正丁醇清除癌细胞的能力超过了乙酸乙酯相;  结论:羽叶蛇葡萄总提取物和萃取物都有不同程度的抗氧化能力,对肝脏组织的损伤具有一定防治作用,其机制可能与清除自由基、抑制脂质过氧化有关,此外还具有抗肿瘤活性。
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