【摘 要】
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目的:建立HEK293细胞和秀丽线虫中外源表达Piezo-2蛋白的模型，通过钙成像技术和膜片钳技术研究与慢性痛相关机械敏感通道蛋白的功能研究。 方法:采用外源表达体系，将小鼠PIE
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目的:建立HEK293细胞和秀丽线虫中外源表达Piezo-2蛋白的模型，通过钙成像技术和膜片钳技术研究与慢性痛相关机械敏感通道蛋白的功能研究。 方法:采用外源表达体系，将小鼠PIEZO-1和PIEZO-2基因cDNA过表达到HEK293细胞，并以膜片钳电生理技术检测机械敏感电流;采用转基因显微注射技术，分别以秀丽线虫piezo-1和piezo-2基因的启动子，将钙敏感荧光蛋白GCaMP5.0和钙非敏感荧光蛋白mCherry表达到秀丽线虫相关基因，以激光共聚焦成像技术得到秀丽线虫中PIEZO-1和PIEZO-2的表达谱;通过活体线虫的动态钙成像技术、膜片钳技术等观察秀丽线虫中表达PIEZO-2蛋白的细胞的触觉钙信号变化。 结果: 1、成功构建了PIEZO-1、PIEZO-2体外表达细胞; 2、检测了秀丽线虫中PIEZO-1、PIEZO-2的表达谱，并得到相关的转基因品系; 3、秀丽线虫OL神经胶质细胞能够直接对机械刺激起响应，而且不依赖于已知机械敏感通道TRP-4和ENaC，PIEZO-2可能在该细胞中起着重要作用，同时结果还表明神经元和神经胶质细胞可能都能对机械刺激起响应，从而神经胶质细胞也可能是人类慢性痛的关键药物靶标。
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