【摘 要】
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洛伐他汀(lovastatin)是一种有重要医用价值的降胆固醇类药物,产生菌为丝状真菌 土曲霉(Aspergillus terreus).以5mg/ml溶壁酶,2.5mg/ml Zymolyase 20T及2.5mg/ml蜗 牛酶组成
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洛伐他汀(lovastatin)是一种有重要医用价值的降胆固醇类药物,产生菌为丝状真菌 土曲霉(Aspergillus terreus).以5mg/ml溶壁酶,2.5mg/ml Zymolyase 20T及2.5mg/ml蜗 牛酶组成混合酶液,在34℃条件下,处理菌丝体球5h,每克湿菌丝体可获得10<8>原生质体,原生质体的再生率达17﹪以上.在此基础上建立了原生质体转化系统.实验表明,土曲霉含有胸腺嘧啶激酶基因(tк),理论上可以以tк基因作为选择标记基因进行同源重组转化,但土曲霉对选择性物质5-溴-2-脱氧尿嘧啶(5-BrdU)不敏感,致使该同源重组转化系统不 能应用.将透明颤菌血红蛋白(Vitreocilla hemoglobin,VHb)结构基因vhb连至构巢曲 霉色氨酸启动子P<,trp>及终止子T<,trp>之间,构建了vhb表达载体pDM253,在此基础上,引入质粒pANUMV2上的潮霉素抗性基因,最终得到表达载体pDV254.摇瓶发酵实验证明, 溶氧不足对土曲霉生长影响较小,但洛伐他汀产量会明显下降.氧限条件下,VHb蛋白的表 达可促进洛伐他汀的合成,对土曲霉生长影响较小.
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