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本文从以下两个方面进行了实验研究-固定化环糊精葡萄糖基转移酶催化淀粉制备环糊精和固定化酵母细胞催化CMP合成CTP。
采用DEAE纤维素为载体,戊二醛为交联剂,对环糊精葡萄糖基转移酶的固定化条件、固定化酶的性质进行了研究,确定了交联剂的最佳用量为0.1gDEAE纤维素与5ml5%戊二醛交联,酶与载体的最佳比例为3.7mg酶/0.1gDEAE纤维素,固定化交联时间8h。环糊精葡萄糖基转移酶经固定化后,最适反应温度不变,最适反应pH从6.0下降到5.0,固定化酶的pH稳定性和热稳定性都有所提高,Km值增大。用固定化酶对2%的马铃薯淀粉进行转化,可以重复使用四次。固定化酶在5mmol/LCaCl2溶液中保存18天,还剩余80%以上的活力。
采用聚乙烯醇(PVA)为包埋剂,确定了酵母细胞的最佳固定化条件:PVA124浓度为15%,载体和酵母的比例:15%PVA(ml):酵母(g)=1:1,采用包埋切块法;固定化酵母细胞使用前需要冻融处理。在此基础上进一步开展了固定化酵母细胞生物合成CTP的单因素研究,确定了最适的转化条件,并对CTP反应液进行了分离纯化和鉴定,初步摸索出一条比较优化的固定化细胞生产CTP的工艺。固定化细胞可以连续使用8次。固定化细胞最适合在-20℃冷冻保存。