论文部分内容阅读
杂交瘤细胞表达的单抗具有特异性强、成分均一可控等优势，广泛应用于疾病治疗、医学诊断、生物免疫检测和蛋白纯化等领域。本课题采用混合培养基模式将杂交瘤细胞进行减血清悬浮驯化培养，通过优化基础培养基，流加培养基，流加策略，接种密度和添加物来提高单克隆抗体的表达量，并进行抗体的分离纯化。 采用逐步减血清悬浮驯化的方法使杂交瘤细胞可以在2％低含量血清的条件下悬浮生长，其中在OptiCHO培养基中达到了完全去血清驯化。考察了四种不同接种密度，筛选出了最适宜杂交瘤细胞生长表达的初始接种密度0.3×106cells/mL。采用不同商业培养基混合配比的方法筛选出RPM1640:SFM4CHO:OptiCHO在4.5:4.5:1混合配比的条件下，可得到最高的最终细胞抗体表达量相比于其他7中混合配比条件。通过对比5种不同的流加液，分析细胞生长状态和产物表达量，筛选出来流加液FD004作为杂交瘤细胞流加培养时的流加培养基。考察流加培养基FD004的每次流加体积和流加次数，每两天流加一次，每次流加量为初始体积的3%时，杂交瘤细胞可得到最高的最终细胞抗体表达量168mg/L相比于其他两种流加策略。通过摇瓶实验确定的杂交瘤细胞培养工艺血清浓度为2%胎牛血清、培养基配比为RPM1640:SFM4CHO:OptiCHO为4.5:4.5:1、接种密度为0.3×106cells/mL，采用批次补料流加培养，每两天流加一次，每次流加量为初始体积的3%在5L搅拌式生物反应器中进行放大培养，得到了245mg/L的抗体表达量。 培养液离心后上清经protein A亲和层析纯化，通过优化抗体纯化时的平衡缓冲液盐浓度和洗脱缓冲液pH值，得到了最佳的亲和分离纯化工艺为洗脱液pH4.0，上清和平衡液中加入2M NaCl。