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狼毒是毒属瑞香科瑞香狼毒或大戟科狼毒大戟、月腺大戟的根,有逐水祛痰、散结杀虫之功效,为常用中药。本论文就不同种狼毒的资源分布、生物学特征、化学成分、药理作用、生物毒性等进行了介绍,并对其综合利用前景进行了分析和展望。同时,对正品狼毒——瑞香狼毒的抗肿瘤活性成分进行了提取、分离及结构鉴定,对其抗肿瘤作用及相关机理进行了探讨,并对其杀虫活性进行了评价,结论如下:
1.采用系统溶剂法对瑞香狼毒进行极性分段提取,在石油醚、乙酸乙酯、丙酮及乙醇四种溶剂提取物中,石油醚提取物抗肿瘤活性最强,是瑞香狼毒主要抗肿瘤活性部位。
2.采用柱层析的方法,从石油醚提取物中分离了18个化合物,鉴定了17个化合物的结构。同时,在对分离得到的单体化合物进行了体外抗癌活性研究中发现,其中有5个化合物对K562、HepG2及Eca-109表现出不同程度的抑制作用,尤其以南大戟内酯B(jolkinolide B)的活性最强。
3.通过体外细胞培养,采用MTT、荧光染色技术、TEM、DNA琼脂糖凝胶电泳及动态细胞周期监测,本文作者发现南大戟内酯B对肿瘤细胞增殖的抑制与其诱导肿瘤细胞凋亡有关,本文作者的实验提示南大戟内酯B可能通过阻滞细胞周期于G1期而诱导肿瘤细胞凋亡。
4.本文作者的实验还证实(1)在南大戟内酯B诱导的凋亡中出现了:MMP消退、细胞色素C的释放、ROS增加、细胞内Ca2+浓度升高、caspases-9和caspases-3的活化。(2)当采用线粒体PTP孔特异性抑制剂CsA预处理后,线粒体膜电位的消退及其他南大戟内酯B引起的凋亡改变都得到缓解,这些结果提示线粒体是南大戟内酯B的主要作用靶点,由南大戟内酯B触发的凋亡信号主要通过线粒体依赖性途径在细胞内传递。
5.通过比较瑞香狼毒醇提物与水提物的杀虫活性,本文作者认为瑞香狼毒醇提物和水提物都表现出了对一定的杀虫效果,但是,与水提物比较,醇提物对菜青虫有较强的拒食作用和触杀作用;对粘虫有较强触杀作用、对棉蚜有触杀作用和拒食作用。