虫草菌胞外多糖对小鼠树突状细胞的调节作用

• 作 者: 宋丹
• 机 构: 南京大学
• 出 处: 南京大学
• 发表日期: 2011年期
• 关键词: 虫草菌胞外多糖 树突状细胞 免疫调节 肉瘤细胞系 分子机制

多糖是冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的主要活性成分之一，我们从一株虫草无性型真菌的发酵液中分离纯化出胞外多糖EPS并且已发现其具有免疫调节作用。本研究主要是探索EPS对小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)及小鼠树突状细胞肉瘤细胞系(DCS)的调节作用，并对于其中的分子机制进行了初步的探索。　　第一部分,为EPS对小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟的调节作用。我们从C57BL/6小鼠中分离出其骨髓细胞并在细胞因子rmIL-4和rmGM-CSF的联合诱导之下得到了未成熟的小鼠骨髓来源的树突状细胞(imBMDC)，以流式细胞术检测了经过细胞因子诱导所得到的树突状细胞的比例，结果显示经过细胞因子的联合诱导，有70％的细胞分化为树突状细胞。流式细胞术检测不同浓度的EPS对BMDC表型及其抗原吞噬功能的影响;RT-PCR检测经EPS作用12h后BMDC IL-12p40、TNF-α、iNOS转录水平上的变化;Western blotting检测EPS对于BMDC中的STAT3磷酸化的影响。结果显示EPS可以显著提高MHCⅡ、CD40、CD80、CD86这些表面分子在BMDC上的表达，并且EPS的作用明显降低了它的抗原吞噬能力;RT-PCR结果表明EPS显著提高BMDC细胞因子(IL-12p40、TNF-α)和iNOS的mRNA水平;EPS对于BMDC的STAT3的磷酸化有着显著的抑制作用。上述结果表明EPS能够显著促进BMDC的成熟，并且这一促进作用很有可能与EPS对于BMDC中STAT3的磷酸化的抑制是相关的。　　第二部分，我们进一步研究了EPS对小鼠树突状细胞肉瘤细胞系(dendritic cellsarcoma，DCS)的影响，DCS是首个建立的小鼠树突状细胞系。我们的研究结果显示EPS可以显著提高DCS细胞表面MHCⅡ、CD40、CD80、CD86的表达;在DCS与CTLL-2小鼠T淋巴细胞共培养的实验中发现，经过EPS处理之后DCS具有明显的促进CTLL-2小鼠T淋巴细胞增殖的特性;ELISA检测EPS处理24h后DCS的培养上清中IL-12和TNF-α表达量的变化;在进一步的研究中我们发现EPS作用30 min后DCS的p-JAK2和p-STAT3的水平显著下降，因此我们推断，EPS可以通过抑制DCS中JAK2/STAT3这一信号通路的活化，来促进DCS的成熟;同时我们检测了EPS作用12h之后DCS的细胞核中NF-κB p65水平的变化，结果发现，随着EPS作用浓度的升高NF-κ Bp65在核内的蓄积呈现上升趋势;因此我们推测EPS在促进DCS的成熟过程中激活了DCS的NF-κB信号通路。因此我们得到如下结论:EPS可以促进DCS的成熟，并且这一促进作用是通过抑制JAK2/STAT3活化以及促进NF-κB的活化而发挥作用的。