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目的:本研究首先建立筛选及优化基于气-质联用(GC-MS)技术的尿液代谢组学预处理方法,进而对慢性肾功能衰竭中医湿证、非湿证患者与正常对照组人群尿液样本进行代谢组学研究,并分析慢性肾衰尿液中相关代谢变化与慢性肾衰中医湿证的相关性,为中医湿证微观化、客观化研究提供一定的科研思路与方法。方法:收集慢性肾功能衰竭患者尿液样本54例,其中湿证组29例,非湿证组25例;正常对照组尿液样本25例;慢性肾衰湿证治疗后患者11例。对所有样本采用以葵酸作为内标的硅烷化衍生反应,及GC-MS分析测试方法得到谱图之后,通过层次聚类分析和主成份分析及ROC曲线比较湿证组、非湿证组及正常对照组之间谱峰的差异性,并利用NIST谱库、Mainlib数据库和Wiley数据库鉴定差异性代谢产物。
结果：(1)慢性肾衰患者和正常人的尿液样本经过上述确定的硅烷化衍生,GC-MS分析方法,利用2-tailed 2-sample t-test检验,共筛选出有显著性差异(P＜0.05)的峰有8个:rt37.1289,rt35.1303,rt35.8297,rt33.8331,rt34.4309,rt24.7429,rt23.8422,rt28.2379。利用NIST谱库、Mainlib数据库和Wiley数据库鉴定了其代谢物为:肌醇、L(-)-阿卓糖、D-呋喃木糖、己糖醇、核糖酸、2-甲氧羰基-3-甲基-3-丁烯酸甲酯、丙酸、廿二烷。慢性肾衰与常人组有显著的差异。(2)湿证跟非湿证进行比较,利用2-tailed 2-sample t-test检验,共筛选出有显著性差异(P＜0.05)的峰有2个:rt26.4406、rt21.5467,并利用NIST谱库、Mainlib数据库和Wiley数据库,鉴定了其代谢物为:3,4-二羟基丁酸,4-甲基-4-羟基-2戊酮。慢性肾衰非湿证组与湿证组有差异。(3)慢性肾功能衰竭中医湿证治疗前后进行比较,利用上述检验方法,共筛选出7个有显著性差异(P＜0.05)的峰。这与慢性肾衰组和正常人差异性代谢产物较为相似,重复的差异性代谢产物为5个,新的差异性的代谢产物有2个,分别是:正碳十九酸,1,2,3,4-戊四醇。这些代谢物的鉴定结果与统计聚类分析和主成份分析的研究结相一致。
结论：(1)本研究以葵酸做为内标的GC-MS代谢组学分析方法以及实验条件的摸索,是慢性肾功能衰竭中医湿证尿液代谢组学研究的前提和基础。(2)基于C-C-MS代谢组学技术,利用2-tailed 2-sample t-test检验筛选出慢性肾衰组与正常对照组尿液样本中有8个差异性峰有统计学意义(P＜0.05)。该差异性峰的筛选,为慢性肾衰的早期诊断提供了客观依据。(3)筛选出慢性肾衰中医湿证组与非湿证组中有2个差异性峰(P＜0.05),并鉴定了其代谢产物为:3,4-二羟基丁酸,4-甲基-4-羟基-2戊酮。这2个差异性代谢产物在慢性肾衰中医湿证的发生发展中可能具有一定的意义,为中医湿证的微观辨证提供一定的客观指标和实验依据。(4)慢性肾功能衰竭中医湿证治疗前后差异性的代谢产物与慢性肾衰组和正常人差异性代谢产物较为相似,新的差异性的代谢产物有2个,这2个代谢产物是否与湿证治疗后有关,值得进一步研究。