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结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，占胃肠道肿瘤的第3位。近年来世界范围内结肠癌的发病率逐年增加，尽管以手术为主的综合治疗取得了一定的进步，但其致死率仍居高不下，据统计每年有超过5万人死于结肠癌，其转移和预后受哪些因素的调控目前仍存在比较大的争议。淋巴管生成是肿瘤侵袭转移的主要途径，也是影响肿瘤生长的重要因素，与淋巴管生成有密切关系的VEGF-C是参与肿瘤淋巴道转移的一个重要因子。近年研究也发现TGF-β信号通路与结肠癌的发生、进展和转移密切相关。在结肠癌的研究中，有关VEGF-C的临床意义研究报道较少，且争议依然存在，有关VEGF-C/VEGFR-3和TGF-β1-Smad4两条信号通路的交互作用的研究也未见报道，需要进一步研究。
目的:体内通过将VEGF-C/VEGFR-3和TGF-β1-Smad4两条信号通路结合起来研究通路成员变化及其对结肠癌分级、淋巴管生成、淋巴结转移和对预后的影响，寻找评价结肠癌预后的指标；体外通过高表达Smad4后观察结肠癌细胞VEGF-C表达变化，进一步明确Smad4与VEGF-C间的关系，为临床早期正确评价结肠癌预后及从抗转移方面治疗结肠癌提供理论依据。
方法:应用免疫组化方法检测147例人结肠癌组织中VEGF-C、VEGFR-3、TGF-β1、TβR-Ⅱ和Smad4的表达，D2-40免疫组化标记淋巴管，检测结肠癌组织中的LVD，应用Cox比例危险度模型和Kaplan-Meier法筛选与结肠癌预后相关指标。构建Smad4基因慢病毒表达载体，转染结肠癌细胞建立Smad4高表达的HCT-116结肠癌细胞，MTT法检测HCT-116结肠癌细胞增殖能力，使用Real Time-PCR和Western blot方法检测转染后结肠癌细胞中TLP、VEGF-A、VEGF-C mRNA和蛋白表达情况及Smad2、Smad3磷酸化水平。
结果:结肠癌组织的LVD高于正常结肠组织(P<0.001)，有淋巴结转移的人结肠痛组织VEGF-C和VEGFR-3的表达高于无淋巴结转移者(P<0.01)，有淋巴结转移的人结肠癌组织Smad4表达低于无淋巴结转移者(P=0.001)；VEGF-C表达与VEGFR-3呈正相关(P<0.001，R=0.391)，与Smad4表达呈负相关(P<0.001，R=-0.607)。Kaplan-Meier法提示VEGF-C阳性患者的总体生存率和无瘤生存率比VEGF-C阴性患者低；Smad4阳性患者总体生存率和无瘤生存率比Smad4阴性患者好。VEGF-C和Smad4的表达水平可以作为评价结肠癌预后的指标。慢病毒转染Smad4后不影响HCT-116细胞的增殖能力；而HCT-116细胞中TLP、VEGF-A、VEGF-C mRNA和蛋白表达水平明显降低、Smad3磷酸化水平升高、Smad2磷酸化水平没变化。
结论:在结肠癌组织中VEGF-C和Smad4与淋巴管生成、淋巴道转移相关，它们可作为评价结肠癌的独立预后指标；高表达的Smad4可降低VEGF-C mRNA和蛋白表达，Smad4可能在结肠癌淋巴管生成和淋巴道转移中起一定作用。