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目的: 为了探讨microRNAs(miRNAs)在人类乳腺癌中的调控作用，本研究利用反义DNA技术敲低miR-221/222的表达从而调节其靶基因组织金属蛋白酶抑制剂（TIMP3），以便研究其对人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖和迁移能力的影响以及其分子生物学作用机制，为乳腺癌的进一步临床治疗研究提供一些新的基础理论依据。 方法: 1.构建低表达miR-221/222的稳定细胞株 依据miRBase数据库中hsa-miR-221、hsa-miR-222的寡核苷酸序列和一段无义序列，分别设计并重组成质粒AS-miR-221（antisense-miR-221即反义抑制miR-221）、AS-miR-222(antisense-miR-222即反义抑制miR-222)和Scramble（无义抑制），并将其分别使用脂质体（LipofectamineTM2000）转染人乳腺癌MCF-7细胞，然后经过G418抗性筛选后建立稳定表达的对照组（Ctrl.、Scramble）细胞株、低表达miR-221和/或miR-222组(即AS-miR-221、AS-miR-222和AS-miR-221/222)细胞株。 转染后于荧光显微镜下检测转染效率;逆转录PCR检测各组稳定表达细胞株中质粒载体上携带的抗性neo基因的表达情况，验证转染是否成功;Westernblot检测各组稳定表达细胞株中靶蛋白TIMP3的表达情况，验证转染是否整合。 2.在稳定低表达细胞模型的基础上进行机制研究 进行逆转录PCR、Real-time PCR、Western blot等检测转染细胞株中miR-221、miR-222、TIMP3 mRNA和ADAM17的表达差异。 3.在稳定低表达细胞模型的基础上进行功能实验 采用CCK-8实验检测并绘制生长曲线观察低表达miR-221和miR-222组细胞的生长能力;划痕修复实验观察转染后细胞的迁移能力。 结果: 转染24小时之后，在荧光显微镜下观察到各转染组细胞的绿色荧光蛋白表达较多，即转染效率较高;转染后检测各组细胞株中neo基因和靶蛋白TIMP3的表达:与对照组比较，neo基因和TIMP3蛋白表达明显升高，即证实反义抑制的低表达稳定细胞株构建成功。与Scramble组细胞表达情况相比较，各低表达miR-221/222(AS-miR-221、AS-miR-222、AS-miR-221/222)组细胞株中miR-221、miR-222的表达量降低，进一步说明质粒构建成功且发挥了抑制miRNAs表达的功效;TIMP3 mRNA水平的表达是升高的，而其调控的金属蛋白酶(ADAM17)的水平是降低的;生长曲线显示各低表达miR-221/222组细胞的生长能力明显受到抑制，划痕结果显示各低表达miR-221/222组细胞的迁移能力是降低的。 结论: 本研究成功构建了低表达miR-221/222的稳定细胞株;并利用功能实验证实，敲低miR-221/222后可以通过上调TIMP3表达来抑制人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖和迁移能力。