定量蛋白质组学分析卵巢癌细胞高转移的机制

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaoping123123
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在女性生殖器官恶性肿瘤中,卵巢发病率排名第三,死亡率占首位。其中,远端转移是卵巢上皮癌高复发率和高死亡率的重要原因之一。研究卵巢癌的转移机制可以帮助我们对卵巢癌进行靶点治疗和预后评估,提高患者生存率。  蛋白质组学本质上是通过在大规模水平上研究蛋白质的特征,从而获得蛋白质水平上的关于疾病发生、细胞代谢等过程的全面整体的认识。质谱技术是蛋白质组学研究中最重要的鉴定技术,其基本原理是样品分子离子化后,根据不同离子的质荷比(m/z)差异来分离离子并确定分子量。  我们以人卵巢癌细胞HO-8910细胞及其高转移细胞系HO-8910 PM为研究对象,通过划痕实验和细胞增殖实验,发现HO-8910 PM细胞迁移速度变快、细胞增殖变快。因此,运用定量蛋白质组学方法,研究HO-8910 PM和HO-8910细胞系间蛋白质表达的区别,从而阐明HO-8910 PM细胞转移增强的机制。收取对数期HO-8910及HO-8910 PM细胞,全蛋白裂解后,进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色,脱色后用胰酶将胶粒中的蛋白质酶解成肽段。将肽段萃取出并用等重同位素标记试剂TMT进行标记,除盐后用质谱仪进行分析。质谱数据用Proteome Discoverer Searching Algorithm(version1.3)搜索UniprotHuman数据库进行分析,得到的Uniprot Accession使用DAVID等在线软件进行信号通路的匹配和分析。选取变化明显的信号通路的相关蛋白进行qPCR和Western blotting验证。  结果分析发现,在HO-8910 PM中有664种蛋白表达量升高,涉及核糖体组成、细胞骨架、细胞黏附、吞噬作用、细胞内吞、糖酵解及丙酮酸代谢等通路。我们发现在HO-8910 PM细胞系中,和上皮细胞向间质细胞转化(EMT)过程相关蛋白S100A4,波形蛋白高表达,证明HO-8910 PM细胞系EMT过程加强。在组学数据中我们发现HO-8910 PM中膜联蛋白A3,CDK5、Arf6和RAS等相关蛋白表达均有增加。卵巢上皮癌细胞可能通过增加膜联蛋白A3的表达量激活CDK5-Rac1/Arf6-Ral/Ralbp1/Epsin通路,调节细胞骨架促进EMT,导致细胞迁移增加。  综上所述,我们的研究通过定量蛋白质组学发现高转移卵巢上皮细胞癌中膜联蛋白A3增加,CDK5-Rac1/Arf6-Ral/ Ralbp1/Epsin信号通路激活及其与EMT过程相关,这些结果为转移机制的研究,提供了一定的理论基础。
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