黄鳝(Monopterus albus)foxl2 cDNA克隆、表达及功能初步分析

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FOXL2(forkhead box L2)是一种具有翼螺旋/头叉DNA结合域的转录因子,在眼睑及成体卵巢颗粒细胞中表达。FOXL2参与脊椎动物雌性性腺早期发育与分化,对卵巢发育和维持卵巢功能具有重要作用,被认为是卵巢发育途径的决定因子,能抑制性腺向雄性途径的分化。   本文利用RT-PCR结合RACE,从黄鳝(Monopterus albus)性腺cDNA文库中克隆了foxl2的全长cDNA序列。黄鳝foxl2 cDNA长2004bp,编码一个306个氨基酸的蛋白;氨基酸序列分析表明它的forkhead doamin与其它各物种具有高度相似性,且C-末端保守性也很高;进化树分析显示,黄鳝FOXL2与其他鱼类的FOXL2蛋白处于同一分支,与蜂巢石斑鱼(Epinephelus merra)的FOXL2同源性高达98%;基因组Walking克隆到黄鳝foxl25上游长约3kb的序列,启动子序列分析发现存在两个潜在的1/2ERE位点,可能介导对雌激素的反应性。   使用RT-PCR检测了foxl2在雌性和雄性黄鳝不同组织中的表达情况。foxl2主要在性腺中高表达,且卵巢的表达量远高于精巢,在雌性和雄性的各个脑区也有不同程度的表达,在垂体中的表达较高,这提示黄鳝foxl2主要在脑-垂体-性腺轴起作用。   用荧光定量RT-PCR的方法检测了性腺中foxl2在发育过程中的表达水平。在雌性发育周期的卵巢中,foxl2在卵黄发生前期(GSI<1)的表达水平最低,在卵黄发生早期(1<GSI<2)上升,并且在卵母细胞成熟期(GSI>5)表达量达到最高,这就提示着foxl2在卵巢发育中起着重要的作用。在黄鳝天然性逆转过程中,卵巢中foxl2高表达,间性早期和中期显著下调,间性后期表达量降到最低,这提示foxl2表达的下降可能对调节性逆转过程卵母细胞的凋亡起着重要作用。   构建了黄鳝foxl2的真核表达载体,将它与黄鳝FTZ-F1真核表达载体、以及cyp19a1a启动子载体共转染TM4细胞,转染实验表明:不论是对黄鳝cyp19a1a的全长启动子还是近端启动子,FOXL2、FTZ-F1a和FTZ-F1b都能刺激黄鳝cyp19a1a的转录,且FOXL2能与FTZ-F1a协同作用,强烈上调cyp19a1a的表达。
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