鹅GnIH及其受体基因的克隆、组织表达以及在颗粒细胞中的研究

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促性腺激素抑制激素(GnIH)能以剂量依赖的模式作用于垂体前叶减少促性腺激素的释放,是目前发现的唯一能抑制生殖系统发育和功能的神经肽。GnIH能从下丘脑、垂体和性腺三个方面同时对繁殖进行调节。除了繁殖方面,它还在压力反射、摄食调节和季节性繁殖等多个方面起着重要的调节作用。为了研究GnIH对鹅繁殖的影响,本试验检测了GnIH及其两个受体RFRPR和NPFFR在产蛋高峰期母鹅不同组织中的表达,并以鹅卵巢颗粒细胞为研究模型,通过添加不同浓度的外源GnIH处理,分析了GnIH对鹅卵巢颗粒细胞功能的影响。主要研究结果如下:(1)获得了GnIH前体mRNA、RFRPR、NPFFR的编码区部分CDS区序列。通过序列分析和氨基酸比对,发现RFRPR与NPFFR之间碱基序列的同源性为65.35%,并且都具有7个相似的氨基酸跨膜结构域。(2)分析了GnIH前体mRNA在产蛋高峰期母鹅不同组织的表达模式。发现GnIH在下丘脑中的表达最高,除了脑部外,在肾上腺、输卵管和卵巢中也有表达,说明GnIH主要的合成场所是下丘脑。(3) RFRPR和NPFFR主要在脑部表达。RFRPR更符合GnIH免疫神经纤维的分布,推测RFRPR是鹅GnIH的主要受体。RFRPR在肾上腺和眼球中的表达,表明GnIH参与了压力反射和季节性繁殖调控。RFRPR在卵巢中也有表达,表明GnIH能直接调控卵巢的功能。(4)以体外培养的鹅卵泡颗粒细胞为研究模型,通过在培养基中人为地添加外源GnIH (0、0.1、10、1000ng/ml)处理细胞,结果表明GnIH能影响颗粒细胞类固醇激素的合成与分泌。外源的GnIH能降低颗粒细胞中StAR、3β-HSD和CYP19基因的表达,也能减少雌二醇和孕酮的分泌。(5)外源GnIH能够降低颗粒细胞的活性,促进细胞的凋亡而减少细胞的增殖,降低细胞中CCND1、CCND2和Bcl-2基因的表达。(6)在GnIH处理的细胞中,GnIH能下调LH-R和FSH-R的表达,但对GnRH和RFRPR的表达影响却并不显著,表明GnIH对颗粒细胞的调控可能是通过LH-R和FSH-R来实现的。
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