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目的:构建人羊膜细胞在纤维蛋白支架上三维培养模型,观察人羊膜细胞能否在纤维蛋白支架上生长;观察人羊膜细胞在纤维蛋白支架上的生物学特性,探讨人羊膜细胞/纤维蛋白支架复合物模拟正常羊膜组织用于胎膜早破破口修复的新途径。方法:1、原代培养并分离纯化人羊膜上皮细胞和间质细胞。2、采用胶内型三维立体培养,在纤维蛋白聚合前,将羊膜间质细胞和纤维蛋白溶液混合,纤维蛋白聚合后,采用胶上型三维立体培养,将羊膜上皮细胞接种到纤维蛋白支架表面,构建人羊膜细胞/纤维蛋白支架复合物,模拟正常羊膜组织。3、采用扫描电镜观察纤维蛋白支架的形态;纤维蛋白支架表面人羊膜上皮细胞的形态;细胞间的接触;细胞与支架的接触。采用透射电镜观察在纤维蛋白胶内生长的人羊膜间质细胞的超微结构和纤维蛋白束的形成。耦合罗丹明的鬼笔环肽染色可特异性的标记显示细胞骨架中的微丝(F-actin)结构,激光共聚焦逐层扫描,观察不同深度层面的信息,并通过计算机软件处理,对人羊膜细胞/纤维蛋白支架复合物进行三维重建。4、绘制羊膜细胞在普通平面培养和三维立体培养中的生长曲线,观察羊膜细胞在不同培养条件下的增殖。5、制备羊膜细胞三维培养模型,动态观察羊膜细胞在纤维蛋白支架中的游走,并观察在不同条件下纤维蛋白胶的收缩。结果:1、人羊膜细胞在纤维蛋白支架上生长良好,细胞沿支架伸展,细胞间有伪足伸出,细胞分泌功能良好。人羊膜细胞/纤维蛋白支架复合物表面的上皮细胞分布在同一平面,形成片状,羊膜间质在内部分布在不同平面,与正常羊膜组织类似。2、羊膜细胞在普通平面培养下,增殖能力旺盛,在三维立体培养中增殖较缓慢,增长幅度较平面培养低。3、羊膜间质细胞随时间推移在纤维蛋白支架中游走,形成细胞团。4、在含羊膜间质细胞的支架复合物中,纤维蛋白胶随时间增长而发生收缩。结论:1、人羊膜上皮细胞和间质细胞在纤维蛋白支架上生长良好,羊膜细胞和纤维蛋白支架相互作用,模拟了羊膜细胞在体内的生物学环境。2、人羊膜细胞/纤维蛋白支架复合物有可能成为胎膜早破破口修复的组织替代物,为胎膜早破的治疗提供新方法。