【摘 要】
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该研究围绕钩体病核酸疫苗的优化,分别从候选基因、候选株、核酸疫苗载体选择及细胞因子基因佐剂等方面开展了相关的前期工作.首先,运用生物信息学理论及分析工具对问号赖型0
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该研究围绕钩体病核酸疫苗的优化,分别从候选基因、候选株、核酸疫苗载体选择及细胞因子基因佐剂等方面开展了相关的前期工作.首先,运用生物信息学理论及分析工具对问号赖型017株与七日热型56610株钩体内鞭毛蛋白FlaB的基因及其氨基酸进行了分析,其中包括基因序列分析,由基因推导的氨基酸序列分析,基因编码的蛋白质的结构预测分析及其作为抗原的T细胞MHC Ⅰ与MHCⅡ表位预测分析.其次,鉴于原核表达的易操作性,为了快速获得钩体FlaB或其不同区间的肽段,以期初步确定该FlaB的表位,构建了可用6×组氨酸亲合柱纯化的问号赖型与七日热型钩体FlaB重组原核表达载体pRSET-flaB<,017>（pDHRSF<,017>）与pRSET-flaB<,610>（pDHRSF<,610>）,在大肠杆菌中诱导表达.最后,将问号钩赖型与七日热型钩体FlaB基因分别插入真核表达载体VR1012与pcDNA3.1中构建了由不同型钩体FlaB基因和不同质粒载体组成的问号钩体内鞭毛蛋白FlaB核酸疫苗,以比较两个常用于核酸疫苗的质粒载体及不同型的FlaB基因的免疫保护作用,同时观察问号钩体FlaB核酸疫苗在不同血清型之间的交叉保护作用.此外,为了增强核酸疫苗的免疫刺激作用,又构建了人白细胞介素-2（IL-2）的真核表达载体,VR1012-IL-2（pDHVRIL-2）为钩体病核酸疫苗的优化奠定了充分的基础.
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