连翘提取物(LC-4)体外诱导Hela细胞凋亡作用研究

• 作 者: 李君
• 机 构: 哈尔滨医科大学
• 出 处: 哈尔滨医科大学
• 发表日期: 2010年期
• 关键词: 连翘 宫颈癌 细胞凋亡 活性成分 促进作用

目的：观察连翘提取物(LC-4)对Hela细胞的体外促凋亡作用，为LC-4在抗肿瘤方面的机制研究及应用提供理论依据。　　
方法：运用大孔吸附树脂层析的方法对连翘进行促凋亡活性成分LC-4进行提取，应用MTT法测定LC-4对Hela细胞增值的抑制作用；采用AO-EB染色、透射电镜、“DNA Ladder”实验检测其促凋亡作用。　　
结果：用水提、醇沉、大孔吸附树脂层析方法，从连翘中分离得到体外诱导人宫颈癌细胞（Hela细胞）凋亡的连翘提取物(LC-4)。　　
MTT比色法：Hela细胞经100μg/ml～10μg/ml LC-4处理48、72小时后，Hela细胞生长均不同程度减慢，随药物浓度的增加，LC-4对Hela细胞体外增殖的抑制率增加，呈浓度依赖性，而且在100μg/ml～40μg/ml具有明显的时间依赖性。说明连翘提取物(LC-4)能够抑制Hela细胞的体外增殖，并呈现一定的浓度和时间依赖性。LC-4对Hela细胞的半数中毒浓度为40μg/ml。　　
AO/EB双荧光染色法：Hela细胞经LC-4处理772小时后进行AO/EB双荧光染色，可见溶媒对照组细胞以正常细胞为主；顺铂对照组以晚期凋亡为主，并可见坏死细胞；100μg/ml剂量组晚期凋亡细胞增多，可见凋亡小体，有少量早期凋亡细胞：75μg/ml剂量组正常细胞减少，凋亡细胞增多，可见到晚期凋亡细胞，并可见坏死细胞。　　
凝胶电泳：HeLa细胞经100μg/ml、75μg/ml LC-4处理72小时后进行2％的琼脂糖凝胶电泳，结果出现了较清晰的梯状条带，说明LC-4对HeLa细胞的抑制作用是通过细胞凋亡来实现。　　
透射电镜观察：空白对照组以正常细胞为主，实验组50μg/ml LC4处理Hela细胞48小时后，凋亡早中期细胞增多，细胞表面绒毛膜脱失，细胞核体积减少，胞浆内空泡明显。实验结果显示LC-4可以诱导Hela细胞凋亡。　　
结论：连翘提取物(LC-4)具有体外诱导Hela细胞凋亡作用，并呈现浓度依赖性。