【摘 要】
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白斑综合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)是全球对虾养殖的主要威胁，至今尚无完全治愈的办法，目前主要的防范措施是提高虾类先天性免疫反应的应答，而细胞因子和细胞因子
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白斑综合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)是全球对虾养殖的主要威胁，至今尚无完全治愈的办法，目前主要的防范措施是提高虾类先天性免疫反应的应答，而细胞因子和细胞因子受体是参与先天免疫反应的重要因子。因此，本课题以红螯螯虾为感染的模式动物，探究了WSSV与细胞因子受体Domeless以及下游JAK/STAT(Janus kinase/Signal transducer and activator of transcription)信号通路之间的作用关系，为预防和治疗白斑病提供新思路。 本研究首先克隆了红螯螯虾JAK/STAT信号通路三种组分的ORF序列:细胞因子受体Domeless、JAK激酶和STAT转录因子(分别命名为CqDome、CqJAK和CqSTAT)。预测CqDome的保守结构域包括胞外区的CBM和FN3结构域，疏水跨膜区和胞内区。进化程度上与虾蟹类甲壳动物高度同源。组织分布显示CqDome在各组织中均有表达，在血细胞中的丰度最高。接下来构建了含GST标签的pGEX-Dome-CBM重组质粒，利用大肠杆菌原核表达体系表达了可溶性融合蛋白，经亲和纯化后纯度较高（约95％）。然后于螯虾造血组织(Hpt)细胞中RNAi敲降CqDome后，WSSV的极早期基因IE1和囊膜蛋白基因VP28的转录水平显著降低，VP28蛋白水平的表达也减弱，表明WSSV的复制受到了抑制;而CqDome基因沉默后，CqJAK和CqSTAT的表达量明显下降，随后CqJAK出现恢复，表明CqDome可正向调控CqJAK和CqSTAT的表达。进一步研究指出，WSSV的感染可增强CqSTAT磷酸化，而抑制CqDome的功能引起CqSTAT磷酸化的显著减少，说明CqDome参与JAK/STAT通路的信号传递，并且通过激活CqSTAT利于WSSV基因的表达。本研究揭示了CqDome在JAK/STAT通路中信号传递的分子机制，并深入阐明CqDome影响WSSV感染的机理，为进一步揭示WSSV的致病机制和提高虾类抗病毒免疫力奠定基础。
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