暗柳橙的遗传转化研究及无籽沙糖桔再生体系的建立

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:beidoubiao
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究以广东地方优良柑桔品种暗柳橙为实验材料,以暗柳橙实生黄化苗上胚轴切段为转化受体,利用农杆菌介导法将CaMV35S启动子驱动的胰岛素(INS)基因(35S::INS)、CaMV35S组成型启动子和笋瓜韧皮部特异启动子(PSP)分别驱动的柑桔偏好密码子编码的抗菌肽D(CAPD)基因(35S::CAPD和PSP::CAPD)进行遗传转化研究。此外,以无籽沙糖桔黄化实生苗上胚轴切段为材料,建立高效的无籽沙糖桔离体再生体系,以期为无籽沙糖桔提高抗病性等基因工程育种奠定基础。  主要研究结果如下:  (1)转35SP::INS研究中,共转化4批暗柳橙黄化实生苗上胚轴切段1488个,经多次继代和筛选培养,获得54个抗性芽,通过生根培养和微芽嫁接获得抗性植株5株。用35SP、nptⅡ和ChvA引物对所得5株抗性苗进行PCR检测,结果显示,5株均为35SP阳性,且ChvA阴性,而其中4株nptⅡ呈阳性。采用EcoRⅠ单酶切,以nptⅡ片段为探针,对4株nptⅡ阳性植株进行Southern blot检测,结果表明,其中2株呈阳性,且分别为1位点插入和2位点插入的转化植株。  (2)转35SP::CAPD研究中,共转化9批暗柳橙黄化实生苗上胚轴切段2991个,经多次继代和筛选培养,获得239个抗性芽,通过诱导生根以及微芽嫁接技术获得抗性植株24株。分别用35SP、nptⅡ和ChvA引物进行PCR扩增,结果显示24株ChvA均呈阴性,其中7株35SP和nptⅡ均呈阳性,另有11株仅35S呈阳性。选取2株nptⅡ阳性植株进行Southern blot检测,表明该2株均呈阳性,且分别为1位点插入和2位点插入的转化植株。  (3)转PSP::CAPD研究中,共转化9批暗柳橙黄化实生苗上胚轴切段3019个,经过多次继代和筛选培养,获得261个抗性芽,通过诱导生根以及微芽嫁接技术获得抗性植株68株。分别用PSP、nptⅡ和ChvA引物对其进行PCR扩增,结果显示54株ChvA呈阴性,其中11株PSP和nptⅡ均呈阳性,另有2株仅PSP呈阳性。选取7株nptⅡ阳性植株进行Southern blot检测,表明仅1株呈阳性,且为1位点插入的转化植株。  (4)通过探讨不同6-BA、IAA浓度及其配比对无籽沙糖桔离体再生的影响,建立了较为高效的无籽沙糖桔离体再生体系。结果表明以MT为基础培养基,添加3.0mg/L的6-BA和0.3 mg/L的IAA的培养基诱导芽的再生效果最好,每个外植体平均可再生不定芽4.2个,芽再生率达90.48%。
其他文献
作为一个记者,怎样为工农兵做好代笔工作,我觉得这是关系到如何为工农兵服务的问题,是帮助他们在报纸上表达自己的思想,意见和要求,鼓励他们参加办报的积极性。这里,我想根
随着现代社会的不断发展和进步,经济发展也日新月异,地籍测量在现代化的进程中的作用越来越突出,但是由于地籍测量受到外界环境以及区域地形的影响比较大,使得测量的精度一直
一、我国基础医学教育模式现状rn目前的教育理念多以教师为主体,采用满堂灌的教学方法,教学手段较为单一.在传统教学模式下,学生主要通过课堂教授及教材获取知识,缺乏多种教
期刊
个人自由和社会秩序是社会学研究中的重要问题,社会秩序是有张力的,社会的维持和改变是社会秩序和个体自由博弈的结果.本文从社会学发展的各个阶段分别讨论了社会秩序和个体
本研究以课题组前期创建的龙眼‘凤梨朵×大乌圆’Fl作图群体和‘石硖×中秋一号’Fl杂种群体为材料,对杂交后代进行了真假杂种鉴定、物候期观察及果实品质分析,以期选育出具有