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冬瓜(Benincasa hispida Cogn.)和节瓜(Benincasa hispida Cogn. Var. chieh—qua How)均属葫芦科冬瓜属,在我国栽培历史悠久。本试验运用RAPD分子标记,对41个冬瓜和节瓜品种的遗传多样性进行了研究,主要研究成果如下:
1、针对瓜类作物多酚类和多糖等物质含量高,难以去除的特点,采用改良CTAB法探索出了一套提取高质量冬瓜和节瓜DNA的方法。
2、采用正交试验设计的方法,对冬瓜和节瓜RAPD条件进行了优化,建立了冬瓜和节瓜RAPD的最佳体系,即25μl反应体系中含1×buffer,模板DNA,Mg2+,dNTPs,引物,Taq酶的浓度分别为20ng,2.0mmol/L,0.24mmol/L,0.3μmol/L,1U。最适宜的退火温度是36.9℃,扩增程序为:94℃预变性5min,94℃变性45s,36.9℃退火45s,72℃延伸90s,共40个循环,72℃延伸10 min。
3、从455条引物中筛选出23条引物,对41个冬瓜和节瓜品种进行RAPD分析,共产生143条扩增带,其中多态性条带81条,多态性检测率为56.6%,扩增条带2—11条带,平均每条引物产生约6.2条带。
4、用软件NTSYSpc(2.10)处理RAPD数据,41个材料间遗传相似系数变化范围为0.60-0.99。聚类分析结果可将供试材料分为6个类群9亚类,主坐标分析可将供试材料分为6个类群10亚类。RAPD分类结果与冬瓜和节瓜的农艺性状和地理分布有一定的相关性。