产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其基因克隆

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:xuelun2003
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究从福建海域的海水、海泥及海藻样品中分离到三株产碱性蛋白酶的海洋细菌菌株3B、6CW、15E,采用16SrDNA分子生物学鉴定结合细菌的常规鉴定方法,确认分离到的三个产蛋白酶的海洋细菌菌株分别是荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens),粘质沙雷菌(Serratiamarcescens),氧化短杆菌(Brevibacteriumoxydans)。其中,海洋氧化短杆菌(Brevibacteriumoxydans)产碱性蛋白酶为首次报道。 对氧化短杆菌15E菌株产碱性蛋白酶的发酵条件进行研究,结果表明:在2%接种量、培养基的初始pH为9.0、装液量在20%左右、培养温度为28℃、摇床转速为200r/min的条件下培养40h时,菌体生长最适且总酶活达到最大;菌株在添加有0.5%牛肉膏、0.1%葡萄糖的酪蛋白培养基中生长和产酶均达到最佳;人工海水中的K+、Ca2+和Mg2+浓度较为适合15E菌株生长和产酶,其中K+对菌株产酶起关键作用。 菌株15E所分泌的碱性蛋白酶的分子量为49.0kDa,等电点为9.3,米氏常数Km为5.6×10-3g/mL。该酶的最适作用温度为60℃,最适pH值为7.0-9.0;Ca2+、Mg2+、K+对酶有激活作用。酶对一些变性剂如SDS、尿素、盐酸胍具有一定的耐受性;PMSF和AEBSF能抑制该蛋白酶,表明该酶属于丝氨酸蛋白酶;EDTA对该蛋白酶有抑制作用,说明该蛋白可能含有金属离子。 氧化短杆菌(Brevibacteriumoxydans)菌株15E碱性蛋白酶apr基因克隆结果表明,该DNA片段长度为1357nt,最大开放阅读框编码447个氨基酸。从第122个氨基酸到第144个氨基酸这段序列可能是一个跨膜区。但是,获得的序列经分析并未存在特征明显的信号肽序列。利用系统发育树分析,所克隆的序列与褐色高温单胞菌碱性蛋白酶前导序列和铜绿假单胞菌碱性蛋白酶基因处于同一个分支,说明该序列为编码碱性蛋白酶的基因。同源性分析结果显示,该蛋白可能是一个结合蛋白酶类,存在一个活性中心。
其他文献
海洋流场是海洋动力环境最为重要的参数之一,利用干涉SAR获取高分辨率、大测绘面积、高观测频率、高测量精度的海洋流场具有巨大的潜力和优势。顺轨干涉SAR直接测量海面一维流
耳朵是人体的听觉器官,它能够辨别声音产生的声波振动,能将振动所产生的声能换成神经信号传递给大脑.在大脑中,这些信号又被翻译成可以理解的词语、音乐和其他声音.中国是世
期刊
无线传感器网络是由大量具备感知、存储、通信和计算功能的传感器节点采用多跳无线通信的方式自组织而成的网络。由于使用灵活、布设方便并且成本低廉,无线传感器网络已经在军
趋磁螺菌Magnetospirillum magneolaclticum AMB-1是Matsunaga等1991年分离到的一株水生螺菌,可沿地磁的磁力线方向运动,菌体内含有自身合成的数目不等的磁小体颗粒。它在微生
开花时间的调控是植物生长发育过程中最重要的生理活动之一。在模式植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)中,至少存在4条调控开花时间的途径,包括光周期途径、春化作用途径、自主开
工作流是一类能够完全或部分自动执行的经营过程,它根据一系列过程规则、文档、信息或任务能够在不同的执行者之间进行传递与执行.随着工作流技术的日趋成熟,越来越多的企业
随着信息技术的广泛应用,如何有效进行通信已经成为当前研究的一个热点。功率放大器前端作为收发信机的核心,是通信系统中的触角和眼睛。现代通信体制对功率放大前端的要求也越
该系统是为机载PD雷达进行整机地面调试和与航空电子仿真器进行联试而开发的,主要用于模拟产生PD雷达在各种工作方式下具有杂波背景的视频回波信号,馈给雷达系统进行调试.该
从上个世纪末开始,人类逐步进入了数字化的时代:相关技术日新月异,各类产品层出不穷。尽管如此,长期以来,数字视频技术的发展及其应用却是滞后于整个数字化的进程。究其原因,一方面
合成孔径雷达(SAR)是一种高分辨率成像雷达,由于它具有全天时、全天候的成像能力及对植被、土壤等具有一定的穿透能力,因此广泛应用于农林、地质、水文、海洋、环境监测、国