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对‘琯溪蜜柚’8月(未成熟时期)、9月(成熟时期)、10月(挂树1个月)、11月(挂树2个月)四个不同时期果实汁胞进行了生理指标、纤维素含量、GA和BR含量测定,转录组测序以及形态学变化观察。通过转录组对纤维素合成途径、GA和BR合成途径以及信号转导进行分析,筛选出四个时期汁胞粒化过程中相关的差异基因,并对显著差异基因利用荧光定量PCR进行表达量分析。主要结果如下:
1.蜜柚果实进入成熟期以后,汁胞开始粒化。随着果实挂树时间的延长,果实TA含量、束缚水含量、自由水含量对汁胞粒化的发生有显著影响。汁胞纤维素染色切片观察发现,成熟期以后,汁胞粒化越严重,细胞壁纤维素染色越深,且细胞壁角隅处纤维素加厚,11月时细胞壁角隅处染色较深。四个时期的果实汁胞纤维素含量变化与形态学观察结果一致。汁胞粒化过程中纤维素含量增加,纤维素含量与粒化率、束缚水、GA和BR含量变化呈显著正相关,与TA、自由水含量呈负相关。推测GA和BR含量的增加参与了次生壁纤维素的合成。
2.对蜜柚汁胞4个时期的12个样品转录组进行测序和分析。8、9、10和11月样品中分别获得了20389、19876、20294、20945个表达基因,其中有18745个基因在四个样品中都有表达,8月特异表达的有370个基因,9月有183个基因特异表达,234、497个基因在10月和11月特异表达。根据差异基因的KEGG途径富集分析,在汁胞粒化过程中,有114个差异表达的转录本被注释到淀粉与蔗糖代谢途径,其中CESA1-1、CESA7-1、CESA2-2、CESA8和CESA4差异显著。GA合成和信号转导相关差异表达基因有46个,BR途径有47个。GA和BR可能参与了汁胞粒化次生壁增厚过程。
3.对纤维素合成的5个差异基因进行了表达分析。CrCESA4、CrCESA7-1、CrCESA8可能参与次生壁纤维素合成。对GA合成和信号转导途径19个差异表达基因进行表达分析。在汁胞粒化过程中,催化GA合成的GA2ox、GA44ox基因、GA受体蛋白基因GID1、调节蛋白基因DELLA和PIF4基因表达量呈持续上升趋势。表明GA对汁胞次生壁纤维素合成有调控作用。对BR合成和信号转导途径21个差异表达基因进行荧光定量表达分析。在汁胞粒化过程中,BR合成酶基因CYP90A1、CYP90D1、BR激酶BRI1和BSK表达量升高,BR代谢基因CYP710A和转录调控因子BZR1表达量降低。表明BR对汁胞次生壁纤维素合成有调控作用。
1.蜜柚果实进入成熟期以后,汁胞开始粒化。随着果实挂树时间的延长,果实TA含量、束缚水含量、自由水含量对汁胞粒化的发生有显著影响。汁胞纤维素染色切片观察发现,成熟期以后,汁胞粒化越严重,细胞壁纤维素染色越深,且细胞壁角隅处纤维素加厚,11月时细胞壁角隅处染色较深。四个时期的果实汁胞纤维素含量变化与形态学观察结果一致。汁胞粒化过程中纤维素含量增加,纤维素含量与粒化率、束缚水、GA和BR含量变化呈显著正相关,与TA、自由水含量呈负相关。推测GA和BR含量的增加参与了次生壁纤维素的合成。
2.对蜜柚汁胞4个时期的12个样品转录组进行测序和分析。8、9、10和11月样品中分别获得了20389、19876、20294、20945个表达基因,其中有18745个基因在四个样品中都有表达,8月特异表达的有370个基因,9月有183个基因特异表达,234、497个基因在10月和11月特异表达。根据差异基因的KEGG途径富集分析,在汁胞粒化过程中,有114个差异表达的转录本被注释到淀粉与蔗糖代谢途径,其中CESA1-1、CESA7-1、CESA2-2、CESA8和CESA4差异显著。GA合成和信号转导相关差异表达基因有46个,BR途径有47个。GA和BR可能参与了汁胞粒化次生壁增厚过程。
3.对纤维素合成的5个差异基因进行了表达分析。CrCESA4、CrCESA7-1、CrCESA8可能参与次生壁纤维素合成。对GA合成和信号转导途径19个差异表达基因进行表达分析。在汁胞粒化过程中,催化GA合成的GA2ox、GA44ox基因、GA受体蛋白基因GID1、调节蛋白基因DELLA和PIF4基因表达量呈持续上升趋势。表明GA对汁胞次生壁纤维素合成有调控作用。对BR合成和信号转导途径21个差异表达基因进行荧光定量表达分析。在汁胞粒化过程中,BR合成酶基因CYP90A1、CYP90D1、BR激酶BRI1和BSK表达量升高,BR代谢基因CYP710A和转录调控因子BZR1表达量降低。表明BR对汁胞次生壁纤维素合成有调控作用。