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卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)，又称为人疱疹病毒8型(Humanherpesvirus8)，是近年来于KS(卡波氏肉瘤)病损组织中发现的一种新型疱疹病毒。流行病学研究证实该病毒与KS、原发性渗出性淋巴瘤及多中心性Castleman病的发生密切相关。KSHV的生活周期包括潜伏期感染与裂解期感染两种形式。在潜伏期感染中，寄主细胞核中有多拷贝的环状病毒基因组存在，只有几个病毒的基因得以表达，多数报道认为这些基因与病毒基因组的维持和免疫逃逸有关。其中，潜伏期相关核抗原(LANA)在维持病毒潜伏期感染中发挥了重要作用，它是一个多功能蛋白，能调节基因转录和细胞周期。本文对LANA在KSHV潜伏期感染中的两种功能开展了的研究。
第一章的内容是文献综述。首先简要介绍了KSHV的发现和分类、病毒粒子结构和病毒生活周期及其感染和致病等情况。然后综述了病毒的潜伏期相关核抗原LANA的结构和功能。最后介绍了本论文研究相关的两个蛋白-白细胞介素22Ⅰ型受体(IL-22R1)及人复制蛋白A的研究进展。
第二章的内容是关于KSHV LANA下调白介素受体IL-22R1表达及其机制的研究。KS病灶形成被认为与炎症失调相关。本文通过基因表达芯片分析的方法对比了KS病灶组织与正常组织中的炎症相关细胞因子及其受体的表达。发现IL-22R1等几个炎症相关细胞因子及受体基因的表达有显著的差异。为了研究该基因的表达调控，构建了其启动子的荧光素酶报告质粒。发现在IL-22R1的启动子区域有一个LANA的结合序列LBS1相似(LBS-like)序列。通过EMSA和ChIP实验，证实LANA在溶液中及在细胞内均能结合到IL-22R1的启动子序列中的LBS-like区域。启动子活性分析表明LANA能剂量依赖地下调IL-22R1启动子活性。进一步研究发现，KSHV潜伏期感染的细胞对IL-22的刺激反应表现明显的迟滞。以上结果提示KSHV LANA能通过直接结合到宿主因子启动子区的顺式作用元件而调节相应基因的表达，LANA的这一功能可能影响宿主细胞的免疫应答和有利于病毒的潜伏感染。
第三章的内容是人细胞复制蛋白A(RPA)通过与KSHV LANA结合参与病毒潜伏期复制的研究。在潜伏期，KSHV基因组利用细胞的复制机器每个细胞周期复制一次。病毒编码的潜伏期相关核抗原LANA对OriP依赖的DNA复制和附加体的维持十分重要。而人复制蛋白A具有单链DNA结合和解链的功能，在DNA复制开始和延伸阶段都起着十分重要的作用。之前的研究表明，SV40大T抗原、乳头瘤病毒的E1、EBV EBNA1等与LANA功能上十分相似的病毒复制蛋白均能与RPA结合，使之参与到病毒自身的的DNA复制。本研究首先通过哺乳动物双杂交系统以及Co-IP实验证实LANA能与细胞复制蛋白A相互作用，并且这种相互作用不依赖于DNA。免疫共沉淀分析发现LANA是通过其C末端与细胞复制蛋白A的70kD亚基(RPA1)结合，而与RPA的另外两个亚基(34kD和14kD蛋白)并不直接结合。IFA证实了LANA与RPA1两种蛋白在病毒潜伏期感染的细胞核内共定位。当用siRNA干扰RPA1的表达后，发现LANA依赖的KSHV潜伏期DNA复制受到抑制。提示RPA参与到了KSHV潜伏期复制。由于RPA在DNA损伤后磷酸化RPA2亚基定位到损伤点，但我们发现LANA在DSB发生的细胞中并不定位到损伤的位点，因此推测LANA与RPA的结合可能与其损伤修复的功能无关。