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目的:1、观察条件性敲除Ihh对小鼠股骨、胫骨长度的影响;2、观察Ihh基因条件性敲除小鼠生长板开始骨化前后一天生长板组织形态学变化,以期观察到四个区的演变过程;3、初步探讨Ihh对生长板骨化早期的影响机制;4、为Ihh异常导致的相关疾病如:BDA1、骨关节炎、骨质疏松等疾病的防治提供理论依据。方法:1、取基因型为Col2α1-Cre ERT2;Ihhfl/fl的刚出生小鼠28只,随机分为实验组Ta组(6天组)、对照组Ca组(6天组),每组14只。再取Col2α1-Cre ERT2;Ihhfl/fl的小鼠12只,随机分为实验组Tb组(8天组)、对照组Cb组(8天组),每组6只。实验组于出生后第一天开始腹腔注射玉米油溶解的TM(Tamoxifen)连续注射3天。对照组腹腔注射等量的玉米油作为对照。2、RT-PCR检测实验组Ta组、对照组Ca组,胫骨近端骨骺中Ihh基因m RNA的相对表达量,明确其敲除率(n=6)。3、测量Ta、Ca、Tb、Cb组左股骨、左胫骨长度,观察对股骨、胫骨长度的影响(n=6)。4、小鼠左胫骨近端X照射及组织切片Von kossa染色,明确实验组胫骨近端生长板开始骨化的前一天。5、小鼠左胫骨近端生长板组织切片番红O染色,观察胫骨近端生长板形态学变化。6、RT-PCR检测实验组小鼠胫骨近端生长板开始骨化前一天,胫骨近端骨骺中RUNX2基因m RNA表达水平的变化(n=6)。结果:1、实验组Ta组骨骺中Ihh基因表达量明显低于对照组Cb组(P<0.05),基因敲除率为65.17%。2、出生后第6天及出生后第8天,实验组股骨长度、胫骨长度较对照组股骨长度、胫骨长度明显缩短(P<0.05)。3、胫骨近端X线及生长板组织切片Von Kossa染色均发现小鼠在出生后第6天,生长板均未发生骨化,而实验组出生后第8天,生长板骨化明显。确认条件性敲除Ihh生长板开始骨化前一天为出生后第6天。4、实验组番红O染色显示:生长板组织结构紊乱,增殖区消失,未发现典型的排列成柱状的增殖区细胞,生长板被肥大软骨细胞所占据,蛋白聚糖分泌减少,分布紊乱。对照组胫骨近端生长板组织结构正常。5、实验组开始骨化前一天胫骨近端骨骺组织RUNX2基因表达量明显高于对照组(P<0.05)。结论:条件性敲除生长板来源的Ihh导致小鼠胫骨、股骨长度缩短,胫骨近端生长板组织结构紊乱、生长板骨化提前,生长板中RUNX2表达提高。敲除生长板来源的Ihh,生长板骨化提前的机制可能与RUNX2的表达相关,为Ihh异常导致的相关疾病如:BDA1、骨关节炎、骨质疏松等疾病的防治提供了理论依据。