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宁夏枸杞(Lycium barbarum)在宁夏种植面大,资源丰富,是传统的药食兼用植物。宁夏枸杞的果实及叶中均富含各种营养成分和药用成分,以往的研究多集中于宁夏枸杞果实,对于资源量大,且黄酮含量高于果实的叶,相对研究却很少。本文以宁夏枸杞叶为研究对象,对宁夏枸杞叶中黄酮类化合物的提取、纯化的工艺条件及抗氧化活性作用进行了研究。通过实验得到如下主要结论:
1.通过溶剂萃取法将宁夏枸杞叶分为不同极性部位,分别测定各萃取部位清除DPPH自由基的能力,确定抗氧化活性部位为正丁醇部位,且其清除DPPH自由基能力与其总黄酮含量呈极显著的正相关;通过薄层层析法确定抗氧化活性部位主要化学成分的类型为黄酮类物质。
2.利用超声波提取法对宁夏枸杞不同品种的叶进行提取,通过紫外分光光度法测定其总黄酮含量及相应抗氧化活性,结果表明,不同品种叶的总黄酮含量高低依次为:宁杞菜1号>0901>宁杞7号>宁杞1号>宁杞2号;抗氧化活性强弱依次为:宁杞菜1号>0901>宁杞7号>宁杞1号>宁杞2号。
3.对超声波提取法进行了工艺优化,以乙醇为溶剂,对影响总黄酮含量的单因素最佳值进行选择,设计正交表进行正交试验,从而筛选出宁夏枸杞叶总黄酮的最佳提取工艺条件:提取溶剂为70%乙醇,料液比为1:30,超声提取50min,超声功率为250W。
4.通过对5种大孔树脂进行了静态吸附解吸附实验及动力学研究,发现HPD600大孔树脂是纯化宁夏枸杞叶黄酮的理想选择。通过HPD600树脂对宁夏枸杞叶总黄酮提取液吸附-解吸附性能的考察和优选,确定出最佳吸附-解吸工艺条件为,黄酮上样液浓度4mg/mL,上样液pH值为5.0,上样速度为1mL/min,洗脱液为70%乙醇溶液,洗脱流速为2mL/min,洗脱液用量为5倍柱床体积。
5.通过HPD600大孔树脂、聚酰胺和Sephadex LH-20对宁夏枸杞叶抗氧化活性最强的部位正丁醇部位进行了柱层析,得到一个化合物,经质谱解析为芦丁。对宁夏枸杞叶粗提物、正丁醇部位黄酮精制品及芦丁清除DPPH自由基的能力进行了比较,实验结果表明其清除DPPH自由基的能力大小为正丁醇部位黄酮精制品>芦丁>粗提物,证明了宁夏枸杞叶黄酮类的抗氧化活性成分除了芦丁以外,还有其他黄酮成分的辅助作用,其中芦丁为主导因子。