【摘 要】
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HSV1-tk/GCV系统是肿瘤自杀基因治疗中研究最为广泛且疗效得到肯定的前体药物系统。tk基因编码的胸苷激酶可将核苷类似物GCV在细胞内代谢成为有毒性的三磷酸化物而发挥抗肿瘤
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HSV1-tk/GCV系统是肿瘤自杀基因治疗中研究最为广泛且疗效得到肯定的前体药物系统。tk基因编码的胸苷激酶可将核苷类似物GCV在细胞内代谢成为有毒性的三磷酸化物而发挥抗肿瘤作用。靶向性差一直是肿瘤基因治疗领域研究的难点和热点。HIF-1α分子氨基酸序列中的氧依赖降解结构域(oxygen dependent degradation domain,ODDD)能够调控HIF-1α在正常氧环境下被泛素-蛋白酶体途径迅速降解。ODDD结构域展现出了较好的调控基因乏氧特异表达潜能,可以为肿瘤基因疫苗乏氧靶向性治疗提供选择。本实验首先利用分子生物学技术构建了三种含有不同长度ODDD片段的荧光报告载体pEGFP-ODDD,并将它们瞬时转染ΦA细胞,RT-PCR和流式细胞术分析EGFP在正常氧环境下(21%O2)和乏氧环境下(1%O2)表达的差异,验证ODDD能否具有乏氧应答功能并筛选出具有ODDD全长片段效应的ODDD2(557-574)亚结构域。为了更好的发挥HSV1-tk/GCV系统对肿瘤的靶向性杀伤作用,我们把ODDD2(557-574)功能域构建到HSV1-tk基因中,将获得pEGFP-tk-ODDD2(557-574)质粒瞬时转染SMMC7721细胞和Hela细胞中,通过MTT法检测细胞的增殖情况来验证ODDD能否特异发挥HSV1-tk/GCV系统对乏氧肿瘤细胞的靶向杀伤作用。
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