探究中国脑胶质瘤患者MGMT基因启动子区域甲基化与表达的关系

• 作 者: 杨建辉
• 发表日期: 2014年期
• 关键词: CpG岛甲基化 脑胶质瘤 MGMT 焦磷酸测序

脑胶质瘤(glioma)是成年人神经系统中最常见的肿瘤,死亡率居高。脑胶质瘤的治疗是世界公认的难题。烷基类化合物——替莫唑胺(temozolomid, TMZ)是一种新型咪唑四嗪类药物,对人类肿瘤细胞系具有广谱抗肿瘤活性。目前,美国和欧洲医学界已经将替莫唑胺定为治疗恶性脑瘤的“金标准”,国际医学界也已将替莫唑胺作为治疗恶性脑瘤的一线药物。MGMT全称为O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferese),它是一种高效的DNA甲基转移酶,此酶可以将DNA分子上的甲基转移到自身氨基酸残基上,以修复各种烷化剂药物造成的细胞DNA烷基化损伤,特别是DNA分子中鸟嘌呤第6位氧原子上的甲基乃至烷基化损伤,从而有效的修复DNA损伤,防止细胞癌变和死亡。另外在脑胶质瘤患者的治疗过程中,MGMT蛋白过量表达会对化疗药物替莫唑胺产生耐药性,而MGMT基因启动子高甲基化,导致该基因转录水平下降(基因沉默),进而导致细胞内MGMT蛋白表达降低。因此,MGMT甲基化修饰作为预测替莫唑胺敏感性的分子标记物被广泛使用。目前临床上对于脑胶质瘤个体化用药指导的分子检测对象一直采用MGMT基因135,137等位点甲基化修饰的检测。但是,后期多项临床研究发现MGMT基因135,137位点的甲基化与药物敏感性没有显著相关性,这就会导致临床用药预测不准确。因此,寻找更准确的甲基化位点指导临床用药至关重要。本文采用了一种全新的基因甲基化检测技术——焦磷酸测序,建立了MGMT基因启动子区域全部甲基化位点定量检测的方法,并对15例脑胶质瘤样本和正常人的293细胞系进行MGMT基因启动子全部甲基化位点的定量检测,通过统计学检验发现了35个有显著性差异的CpG位点,后期通过实时定量PCR的方法分析脑胶质瘤病人样本MGMT基因的表达,然后将甲基化位点和表达进行关联分析,初步找到了8个与表达关系密切的CpG位点(P<0.0001),为后期指导肿瘤个体化治疗有着重要的作用。焦磷酸测序技术是检测甲基化位点的“金标准”,其灵敏度高,周期短,一次检测可实现对单个CpG位点或者多个连续位点进行定量分析。