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鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus, CAV)可以破坏造血系统,并可使淋巴器官萎缩,导致鸡群免疫抑制,CAV的免疫抑制又经常使感染鸡群并发或继发其它病原体的多重感染。本文通过对1日龄SPF鸡的攻毒实验系统的研究了CAV野毒株CAV-C14对SPF鸡的致病性。攻毒28天和42天后,CAV-C14能够引起SPF鸡体重下降、免疫器官(胸腺、法氏囊)萎缩以及股骨、胫骨骨髓颜色变淡变黄等临床症状,在攻毒后12天和14天后均可引起循环血中红细胞数一定程度的下降,攻毒14天后红细胞数比对照组显著下降(P<0.05)。但在104TCID50/只的攻毒剂量下没有引起SPF鸡的死亡。用1日龄SPF鸡人工感染C14株CAV和禽网状内皮增生病病毒(REV),研究了CAV单独以及与REV共感染时对鸡体疫苗免疫反应的影响。在攻毒后21天,CAV单独感染组( 5.81±1.38)与REV单独感染组(4.56±2.57)的AIV-H9 HI抗体滴度(log2)比对照组(7.43±1.16)显著降低,共感染组(2.8±2.57)的抗体滴度下降更为显著;在攻毒后35天,CAV单独感染组(7.55±1.63)与REV单独感染组(7.31±2.78)AIV-H5 HI抗体滴度(log2)比对照组(9.42±1.57)显著降低,共感染组(4.86±3.08)抗体滴度下降的更为显著。结果表明,在用禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗免疫后,CAV单独感染组与REV单独感染均能显著抑制鸡体对H5和H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的HI抗体反应,在CAV与REV共感染后,这种抑制作用更为明显。在攻毒21天和35天后,C14株CAV单独感染能够抑制鸡体对新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反应,但与对照组在统计学上的差异不显著。然而,C14株CAV可以显著加重(P<0.05)REV感染对鸡体在免疫NDV和IBDV疫苗后抗体反应的抑制作用。本研究证实了CAV与REV共感染时对SPF鸡在免疫抑制上存在协同作用。用PCR方法分段扩增出CAV-C14基因组的三条部分重叠片段,分别克隆于T载体并进行测序,拼接后得到其全基因组序列。测序结果表明,CAV-C14株基因组全长2298bp,含有三个互相重叠的开放阅读框和一个调控区。将C14与国内外已发表的CAV参考株基因组比较,同源性为97.2%-99.2%。序列比较还表明,CAV非编码区中含有的多个与复制及转录调控相关的基序序列都非常保守。CAV的三个编码基因VP1、VP2和VP3均有一定程度变异,以VP1变异性最大,且不同毒株间的三个蛋白质氨基酸序列的变异是互不相关的。根据已发表的鸡传染性贫血病毒(CAV)的基因序列设计合成一对引物,以山东分离野毒株CAV-C14为模板,扩增了VP1基因内部的一大段序列。将PCR产物按正确的阅读框架克隆到表达性载体pGEX-6P-1谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游。将筛选到的相应重组质粒转化的大肠杆菌BL21株,在1.0mM IPTG浓度和37℃条件下诱导表达。SDS-PAGE电泳后将表达产物回收并免疫小鼠,所得抗血清可在间接免疫荧光试验中与CAV感染的MSB1细胞中呈阳性反应,抗体效价达到26。试验结果表明,在大肠杆菌中表达的VP1蛋白保留了天然蛋白的某些抗原性。而且,由此得到的抗体可作为诊断用的特异性单因子血清