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海参作为珍贵的养生食品,在我国食用历史久远,对海参中的活性成分研究具有重要的价值。脂肪酸成分是海参中的一类重要的活性成分,具有多种药理作用,但国内外学者对海参中的脂肪酸研究较少。本论文以市场上出售的刺参干品作为研究对象,以气相色谱(GC)、质谱(GC-MS)和棒薄层色谱氢火焰离子化检测法(TLC-FID)为主要手段,全面科学地对海参中的脂肪酸成分进行了测定,优化了从海参中提取并衍生脂肪酸成分的前处理方法,建立了色谱和质谱分析海参脂肪酸甲酯的方法,定性定量的分析了海参中脂肪酸成分的组成,并结合指纹图谱技术对海参质量进行了初步的评价,同时探索了利用TLC-FID分析脂肪酸成分的新方法。具体内容及研究成果如下:
首次将色谱质谱指纹图谱方法引入对海参样品的质量评价,以海参脂肪酸甲酯GC-MS总离子流图为基础,按照建立指纹图谱的相关参数和评价体系进行讨论。结果显示,不同批次海参样品中的脂肪酸种类相同,但含量差别很大,相似度较低,无法满足建立指纹图谱的条件,从而表明现在市售干海参样品有效成分差别较大,质量参差不齐,这种方法为科学全面的对海参进行质控提出了一个新的可能性。利用建立的GC-MS分析脂肪酸甲酯的方法,分析其他海洋药用生物样品,发现不同生物的脂肪酸谱图湿著不同,可以直观的进行初步区分。
在前处理中,建立了ASE法快速提取海参中的脂肪酸的方法,结果表明与传统的萃取方法相比,ASE萃取技术具有时间短、济剂用量少、萃取效率高等显著特点。
利用新型号的气质联用仪,建立了海参脂肪酸GC-MS快速测定方法,能够快速从海参中提取脂肪酸并进行衍生,并在15min内获得海参中全部脂肪酸成分分离良好的总离子流图。利用质谱和标准品对照联合定性,测定了海参中的脂肪酸成分的种类,分析海参中不同种类脂肪酸成分的组成特点,并利用外标法定量检测海参中的脂肪酸成分含量。结果发现,海参中EPA和DHA含量较高,而这两种多不饱和脂肪酸具有很高的活性,为进一步研究海参脂肪酸与其药理作用的关系奠定了基础。比较了其他海洋药用生物脂肪酸成分,结果表明,海星中的有效脂肪酸成分含量最高,可在某些方面可以考虑替代其他几种较昂贵的海洋药物。
使用棒薄层氢火焰离子化检测仪器,首先建立了TLC-FID测定脂肪酸甲酯成分的方法,得到了分离良好的色谱图;然后利用棒薄层色谱法中硅胶棒的特性和FID检测器的仪器性能,利用部分扫描功能,联合GC-MS定性分析样品;再进一步,将色谱棒上已分离的杂质成分除去,然后将保留下的有效成分溶解下来,制备成粗制标准品,而用过的色谱棒经活化后可以重新使用。利用此方法得到粗制的脂肪酸甲酯,用于海参脂肪酸定量计算,得到结果与利用购买的标准品进行GC-FID定量计算的结果进行比较,差距较小,为TLC-FID的应用提供了新的可能性。