【摘 要】
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目的:特发性膜性肾病（Idiopathic membranous nephropathy,IMN）患者蛋白尿和蛋白尿相关症状被认为是肾脏功能损伤的表现,但是IMN发病和转归的机制尚不清楚。蛋白水解系统异常调节是已知导致疾病的一个生物途径,因此我们假设在IMN中蛋白酶的异常表达可能与IMN尿液多肽的产生相关。近些年来,高通量质谱技术的发展促进了蛋白质组学在疾病研究中的应用,尿液多肽组学可以为探究IM
【基金项目】
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辽宁省自然科学基金指导计划（No.20180550523）基于液相色谱串联质谱的原发性膜性肾病生物标志物研究；
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目的:特发性膜性肾病（Idiopathic membranous nephropathy,IMN）患者蛋白尿和蛋白尿相关症状被认为是肾脏功能损伤的表现,但是IMN发病和转归的机制尚不清楚。蛋白水解系统异常调节是已知导致疾病的一个生物途径,因此我们假设在IMN中蛋白酶的异常表达可能与IMN尿液多肽的产生相关。近些年来,高通量质谱技术的发展促进了蛋白质组学在疾病研究中的应用,尿液多肽组学可以为探究IMN的发病机理提供新的思路。本研究旨在分析IMN尿液多肽组学及相关蛋白酶的变化在特发性膜性肾病中的意义。研究方法:本研究采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）对20例健康个体、22例IMN及15例其他肾病患者尿液中自然产生的多肽进行分析,鉴定到多肽特异性匹配的蛋白质并筛选出IMN特异性差异表达的蛋白质。采用Proteasix蛋白酶预测数据库预测可以水解这些蛋白而产生内源性多肽的蛋白酶,再利用公共蛋白质组学i Pro X数据库和基因组学GEO数据库分别验证筛选到的IMN差异表达蛋白和蛋白酶基因的表达水平,最后通过蛋白质免疫印迹实验（Western Blot）验证关键蛋白酶:钙蛋白酶、组织蛋白酶和基质金属蛋白酶在IMN肾脏组织的表达水平。结果:1、共鉴定到1080个多肽特异性匹配蛋白质,筛选到279个IMN尿液差异表达蛋白,预测到32种可能产生内源性多肽的蛋白酶;2、55个IMN尿液差异表达蛋白在肾脏组织中也差异表达,IMN尿液差异表达蛋白主要参与蛋白酶体、溶酶体、肌动蛋白细胞骨架的调节及抗原处理和呈递等信号通路;3、部分32种预测的蛋白酶在、IMN肾小球中异常表达;4、Western Blot验证实验表明IMN患者肾脏组织中钙蛋白酶CAPN1、基质金属蛋白酶MMP14和组织金属蛋白酶CTSS的表达水平升高。结论:1、IMN患者和健康个体及其他肾病患者的尿液多肽组存在差异,尿液多肽组学能够反映IMN尿液多肽组份的变化;2、尿液多肽可能反映IMN肾脏组织分子水平的变化;3、IMN患者肾脏钙蛋白酶、基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶表达的变化可能和尿液多肽的产生和肾脏组织损伤相关。
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