EZH2调控RUNX1介导高糖诱导的肾小管上皮细胞的炎症反应机制和乌索酸的干预研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:crp123
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目的:检测高糖培养的人肾小管上皮细胞(Human kidney proximal tubular epithelial cells,HK-2)内同源序列2的增强子(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)、RUNT相关转录因子1(Runt-related transcription factor 1,RUNX1)和DC特异性细胞间粘附分子3结合非整合素(Dendritic cell-specific adhesion molecule-3-grabbing non-integrin,DC-SIGN)的表达变化,分析EZH2是否调控RUNX1表达及乌索酸是否可抑制RUNX1和DC-SIGN而降低炎症因子分泌。研究方法:根据高糖刺激时间,将体外培养的HK-2细胞分为对照组(0h)、高糖组(12h、24h、48h),实时定量PCR和Western Blot检测对照组和高糖组内RUNX1和DC-SIGN表达差异。根据干预方式,将HK-2细胞分为对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(30.5mmol/L葡萄糖)、乌索酸组(30.5mmol/L葡萄糖+1 umol/L乌索酸)、Ro5-3335组(30.5mmol/L葡萄糖+100 umol/L Ro5-3335),均干预48h,实时定量PCR和Western Blot检测各组RUNX1和DC-SIGN的表达水平,ELISA检测各组TNF-α和IFN-β分泌水平。将HK-2细胞分为正常糖组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(30.5mmol/L葡萄糖)、正常糖抑制组(5.5mmol/L葡萄糖+20umol/L DZNep),Western Blot检测各组EZH2和RUNX1蛋白表达。结果:1、较之对照组,高糖组RUNX1和DC-SIGN的m RNA和蛋白表达升高。2、较之高糖组,乌索酸组和Ro5-3335组的RUNX1和DC-SIGN在m RNA和蛋白水平上的异常表达均显著降低。3、较之对照组,高糖组的TNF-α和IFN-β分泌量均明显升高,P<0.05;较之高糖组,乌索酸干预组的TNF-α和IFN-β分泌水平均明显降低,P<0.05。4、较之对照组,高糖组EZH2蛋白水平表达降低;且较之正常糖组,EZH2抑制后的RUNX1表达显著升高。结论:1、高糖下,人肾小管上皮细胞内RUNX 1和DC-SIGN表达上调,呈时间依赖性升高;RUNX 1和DC-SIGN的上调导致TNF-α和IFN-β分泌增加、介导高糖诱导的炎症反应。2、高糖诱导HK-2细胞,EZH2蛋白水平下调、促进RUNX 1高表达,正常糖培养的HK-2细胞加入EZH2抑制剂同样促进RUNX 1高表达,可考虑将EZH2作为缓解肾脏炎症的新靶点。3、乌索酸可降低HK-2细胞内高糖诱导的RUNX1和DC-SIGN高表达,从而减少TNF-α和IFN-β分泌,缓解炎症损伤。
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