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抗原表位(epitope)又称抗原决定簇(antigenic determination)，是指抗原分子上的一个免疫活性区，具有特殊结构和免疫活性的化学基团，是具有刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞并能够被其识别的部位。按照与不同的抗原受体细胞结合，分为B细胞抗原表位和T细胞抗原表位，T细胞表位多为线型表位，且在免疫应答反应中发挥着非常重要的作用。 PCV2针对T淋巴细胞的反应是由ORF1和ORF3非结构蛋白上抗原表位引起的。Stevenson等(2007)研究PCV2 T细胞抗原表位(Tlymphocyte epitope，TCE)时，通过合成线性的含有20aa的多肽，检测它们诱导外周血液单核细胞中T淋巴细胞的增殖能力，筛选获得了3个具表位活性的多肽，均是有免疫优势的多肽片段，分别是由PCV2 ORF1编码的(第81～100位和201～220位氨基酸)2个多肽，由PCV2 ORF3编码的(第31～50位氨基酸)另一个多肽。 本研究根据报道的这3个具有T淋巴细胞表位活性的多肽，按照E.coli表达系统密码子的偏嗜性，选择高表达密码子重新设计新序列，然后把3个T淋巴细胞抗原表位基因连接起来合成了一个新的完整的TCE基因，并加入终止密码子TAA，基因大小为183bp。在其序列的上游5端加入了EcoR I限制性内切酶位点，下游3加入了HindⅢ限制性内切酶位点，送由上海英俊生物技术有限公司重新合成序列并转入pMD18-T Simple载体中，阳性克隆质粒命名为pMD18-TCE。 将重组克隆质粒pMD18-TCE的EcoR I、HindⅢ双酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中，构建PCV2 T淋巴细胞表位成熟蛋白重组表达质粒pET-TCE。鉴定分析证实重组表达质粒pET-TCE的正确性后，将其转化至BL21(DE3)宿主菌中，用IPTG诱导蛋白表达，通过SDS-PAGE电泳和Western Blotting分析表明，融合蛋白分子量约为26kD，比理论值稍偏大一点，但是能被PCV2阳性血清识别，具有良好的抗原性，表明pET-TCE在BL21(DE3)宿主菌中成功表达。IPTG诱导浓度为1.0mmol/L，诱导起始时间为3h，诱导5h后表达量即达到高峰。 将诱导后的菌体进行超声破碎，SDS-PAGE检测表明该融合蛋白主要以包涵体形式存在。大量诱导表达重组融合蛋白，利用北京世纪康为的蛋白纯化试剂盒6*His-Tagged Protein Purification Kit进行纯化，将纯化好的融合蛋白免疫6wSPF昆明雄鼠，同时设高剂量免疫组、低剂量免疫组、Inclusion Body Elution Buffer对照组、PBS对照组。第一次免疫后的10d和24d分别进行二免和三免。三免后7d每组随即取5只雄鼠，制备淋巴细胞，用MTT比色法测定其淋巴细胞转化率。结果表明，高剂量和低剂量免疫组均能诱导小鼠产生良好的细胞免疫效应，且高剂量组与低剂量组产生的效应没有显著的差异。 本研究在大肠杆菌表达系统中成功表达了PCV2 ORF1和ORF3 T淋巴细胞表位成熟蛋白，具有良好的免疫原性。把表达的重组蛋白纯化后作为亚单位疫苗免疫小鼠，有良好的细胞免疫效应，可以更深入地了解PCV2 ORF1和ORF3的功能与应用，以及进一步为开发新的PCV2基因工程疫苗建立了良好的理论基础。