Ghrelin逆转雌激素诱导雄性小鼠胸腺萎缩及其部分细胞因子基因表达的变化

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本试验采用SYBR技术,建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),应用该方法检测小鼠胸腺IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IFN-γ、LIF、OSM、SCF、THF、TNF-α mRNA表达量的变化,分析各个细胞因子之间的相互联系,揭示Ghrelin对雌激素诱导小鼠胸腺萎缩的逆转作用的分子机制。  动物实验为期四周:雌激素+Ghrelin实验组:前两周隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液(含苯甲酸雌二醇0.1 mg)0.05 ml/只,后两周隔日腹腔注射Ghrelin(含Ghrelin120μg)0.1 ml/只;雌激素+生理盐水对照组:前两周隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液(含苯甲酸雌二醇0.1 mg)0.05 ml/只,后两周隔日腹腔注射0.9%生理盐水0.1 ml/只;生理盐水对照组:前两周隔日腹腔注射0.9%生理盐水0.05 ml/只,后两周隔日腹腔注射0.9%生理盐水0.1 ml/只。动物实验结束后,统计小鼠胸腺指数,应用光镜观察胸腺形态学变化。根据基因数据库IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IFN-γ、LIF、OSM、SCF、THF、TNF-α序列和SYBR实时荧光定量分析原理,由TAKARA公司分别设计出各个细胞因子的特异性引物。提取胸腺组织总RNA,逆转录为cDNA,以管家基因β-actin为内参基因,进行实时荧光定量PCR反应,检测各样本中IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IFN-γ、LIF、OSM、SCF、THF、TNF-α mRNA表达量的变化。  结果表明,注射Ghrelin后,雌二醇诱导的小鼠萎缩胸腺在形态学上基本恢复到正常水平,雌激素+Ghrelin组的小鼠胸腺重量和胸腺指数要显著高于雌激素+生理盐水组(P<0.05),而与生理盐水对照组无显著差异。IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IFN-γ、LIF、OSM、SCF、THF、TNF-α mRNA含量显著降低(P<0.05),而IL-7 mRNA含量稍微升高(P>0.05)。由此我们推测,Ghrelin逆转雌激素诱导的小鼠胸腺萎缩的分子机制是:一方面通过抑制IL-6、OSM、LIF、SCF等细胞因子的表达,从而促进胸腺细胞的增殖:另一方面通过抑制IL-1、IL-2、IL-4、IL-12、THF等细胞因子的表达,从而减少TNF-α和IFN-γ的分泌,进而抑制胸腺细胞的凋亡。
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