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本试验采用SYBR技术,建立实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),应用该方法检测小鼠胸腺IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IFN-γ、LIF、OSM、SCF、THF、TNF-α mRNA表达量的变化,分析各个细胞因子之间的相互联系,揭示Ghrelin对雌激素诱导小鼠胸腺萎缩的逆转作用的分子机制。 动物实验为期四周:雌激素+Ghrelin实验组:前两周隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液(含苯甲酸雌二醇0.1 mg)0.05 ml/只,后两周隔日腹腔注射Ghrelin(含Ghrelin120μg)0.1 ml/只;雌激素+生理盐水对照组:前两周隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液(含苯甲酸雌二醇0.1 mg)0.05 ml/只,后两周隔日腹腔注射0.9%生理盐水0.1 ml/只;生理盐水对照组:前两周隔日腹腔注射0.9%生理盐水0.05 ml/只,后两周隔日腹腔注射0.9%生理盐水0.1 ml/只。动物实验结束后,统计小鼠胸腺指数,应用光镜观察胸腺形态学变化。根据基因数据库IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IFN-γ、LIF、OSM、SCF、THF、TNF-α序列和SYBR实时荧光定量分析原理,由TAKARA公司分别设计出各个细胞因子的特异性引物。提取胸腺组织总RNA,逆转录为cDNA,以管家基因β-actin为内参基因,进行实时荧光定量PCR反应,检测各样本中IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IFN-γ、LIF、OSM、SCF、THF、TNF-α mRNA表达量的变化。 结果表明,注射Ghrelin后,雌二醇诱导的小鼠萎缩胸腺在形态学上基本恢复到正常水平,雌激素+Ghrelin组的小鼠胸腺重量和胸腺指数要显著高于雌激素+生理盐水组(P<0.05),而与生理盐水对照组无显著差异。IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IFN-γ、LIF、OSM、SCF、THF、TNF-α mRNA含量显著降低(P<0.05),而IL-7 mRNA含量稍微升高(P>0.05)。由此我们推测,Ghrelin逆转雌激素诱导的小鼠胸腺萎缩的分子机制是:一方面通过抑制IL-6、OSM、LIF、SCF等细胞因子的表达,从而促进胸腺细胞的增殖:另一方面通过抑制IL-1、IL-2、IL-4、IL-12、THF等细胞因子的表达,从而减少TNF-α和IFN-γ的分泌,进而抑制胸腺细胞的凋亡。