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目的：
基于中医“痰”是津液代谢病理产物的理论，建立高脂血症痰浊证“病证结合”ApoE-/-小鼠动物模型，在前期研究对药“茯苓-泽泻”具有较好降低血脂作用的基础上，提出“茯苓-泽泻”降血脂可能与水液代谢水通道蛋白有关的假说，采用对药“茯苓一泽泻”干预高脂血症痰浊证ApoE-/-小鼠动物模型，通过网络药理学筛选出的水通道蛋白，探讨水通道蛋白2(AQP2)与iNOS和N0的作用，AQP8与SREBP-2和HMGCR的作用，AQP9对脂代谢的影响，从水液代谢方面揭示“对药”茯苓-泽泻对脂质调节的作用机制，丰富中医“痰”是津液代谢病理产物的理论。
方法：
(一)高脂血症痰浊证“病证结合”动物模型的复制、给药与评价
1、ApoE-/-小鼠造模:将70只ApoE-/-小鼠放入SPF级动物房喂养，第1周适应性喂养后，按体重随机平均分为六组，将其中一组作为正常对照组，予以普通饲料喂养，其他的组别为模型组，予以高脂饲料喂养。喂养4周后，进行眼眶采血，收集血清，予以测验血脂四项，评价ApoE-/-小鼠模型。
2、模型组给药干预:将高脂喂养组的模型组小鼠重新分5组，分别命名为:模型对照组、西药对照组、茯苓-泽泻低剂量组、中剂量组及高剂量组，除模型对照组不给药外，其它各组给予相应药物干预7周，记录各组ApoE-/-小鼠的体重、进食饲料和饮水，给药完成7周后，称重，眼眶取血检测血脂四项(TC、TG、LDL-C、HDL-C)。
(二)对药“茯苓-泽泻”调节脂质作用机制的研究
将正常对照组、模型对照组、西药对照组、茯苓-泽泻低剂量组、中剂量组及高剂量组ApoE-/-小鼠取肾组织和肝组织进行检测，。肾组织的N0生化指标，肾组织检测AQP2和iNOS在Q-PCR层面的表达，肝组织检测AQP8、SREBP-2、HMGCR和AQP9在Q-PCR层面的表达，选取三种水通道蛋白AQP2、AQP8和AQP9在Western-Blot(WB)层面的表达，从水通道蛋白方面揭示对药茯苓-泽泻对高脂血症痰浊证脂质调节作用的机制。
结果：
(一)模型复制与评价结果
将ApoE-/-小鼠造模4周后，检测血脂四项，模型组的TC值、TG值和LDL-C值升高，与正常对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.01)，模型组的HDL-C值降低，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P＜O.05)，符合混合型高脂血症实验动物模型的标准，结果提示复制高脂血症痰浊证病症结合动物模型成功。
以TC值将模型组ApoE-/-小鼠随机分为模型对照组、西药对照组、茯苓-泽泻低剂量组、中剂量组和高剂量组，各TC值比较，差异均无统计学意义(P＞O.05)，提示用药干预前各组分配无差异，基线具有可比性。
(二)对药“茯苓-泽泻”干预后血脂四项检测结果比较
给药7周后，①TC值水平:西药对照组、茯苓-泽泻中剂量组、高剂量组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.05):中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05)。②TG值水平:西药对照组、茯苓-泽泻中剂量组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05);中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。③LDL-C值水平:西药对照组、茯苓-泽泻低剂量组、中剂量组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.05)，中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05);④HDL-C值水平:相对于模型对照组，随着中药剂量越高，HDL-C值降低的趋势越来越明显。
以上结果提示:茯苓-泽泻低剂量组(LDL-C)和高剂量组(TC)降低胆固醇功能动物实验结果阳性，茯苓-泽泻中剂量组(TC、TG、LDL-C)降低血脂效果最佳，其效应与西药对照组大致相当。
(三)水通道蛋白和脂代谢相关指标结果
1.肾组织中水通道蛋白调节和脂代谢相关指标结果
①AQP2含量:各给药组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.01)；茯苓-泽泻低剂量、中剂量与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05)。②iNOS含量:茯苓-泽泻低剂量、高剂量组、西药对照组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.05):中药各剂量组与西药对照组比较，差异无统计学意义(P＞O.05)。③N0含量:各给药组(除了茯苓-泽泻低剂量组)相对于模型对照组均有下调趋势;④AQP2蛋白水平:各给药组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.05)，中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。
2.肝组织中水通道蛋白调节和脂代谢相关指标结果①AQP8含量:茯苓-泽泻低剂量组、高剂量组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(/2＜0.05);茯苓-泽泻中剂量组、高剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05)。②AQP9含量:茯苓-泽泻高剂量组与模型对照组比较，差异有统计学意义(P＜O.05);中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。③SREBP-2含量:茯苓-泽泻高剂量组与模型对照组比较，差异有统计学意义(P＜O.05)，中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05):HMGCR含量:各给药组相对于模型对照组均具有上升趋势。AQP8和AQP9蛋白水平:肝组织AQP8和AQP9蛋白表达水平均无明显差异，结果提示其表达具有上调趋势。
结论：
(1)成功复制高脂血症痰浊证动物模型:ApoE-/-小鼠经过4周高脂饲料喂养后，检测血脂四项，符合混合型高脂血症痰浊证实验动物模型的标准，提示模型建立成功，为后面开展相关研究奠定基础。
(2)对药茯苓-泽泻具有降脂效应。
将模型组ApoE-/-小鼠再分配5组，给药7周后，提示茯苓-泽泻中剂量组降低血脂效果最佳，其效应与西药对照组(阿托伐他汀钙片)相当。
(3)茯苓-泽泻降脂的作用机制
通过网络药理学结合文献研究，对药“茯苓-泽泻”对水通道蛋白相应指标的影响，结果提示其降脂机制是通过抑制肾脏iNOS基因表达，进而抑制AQP2基因与蛋白表达，代偿性提升肝组织AQP8、AQP9和SREBP-2的表达，其作用机制可能抑制水通道蛋白的表达，增加利尿而达到降脂效应，与茯苓-泽泻具有利水作用有关。
基于中医“痰”是津液代谢病理产物的理论，建立高脂血症痰浊证“病证结合”ApoE-/-小鼠动物模型，在前期研究对药“茯苓-泽泻”具有较好降低血脂作用的基础上，提出“茯苓-泽泻”降血脂可能与水液代谢水通道蛋白有关的假说，采用对药“茯苓一泽泻”干预高脂血症痰浊证ApoE-/-小鼠动物模型，通过网络药理学筛选出的水通道蛋白，探讨水通道蛋白2(AQP2)与iNOS和N0的作用，AQP8与SREBP-2和HMGCR的作用，AQP9对脂代谢的影响，从水液代谢方面揭示“对药”茯苓-泽泻对脂质调节的作用机制，丰富中医“痰”是津液代谢病理产物的理论。
方法：
(一)高脂血症痰浊证“病证结合”动物模型的复制、给药与评价
1、ApoE-/-小鼠造模:将70只ApoE-/-小鼠放入SPF级动物房喂养，第1周适应性喂养后，按体重随机平均分为六组，将其中一组作为正常对照组，予以普通饲料喂养，其他的组别为模型组，予以高脂饲料喂养。喂养4周后，进行眼眶采血，收集血清，予以测验血脂四项，评价ApoE-/-小鼠模型。
2、模型组给药干预:将高脂喂养组的模型组小鼠重新分5组，分别命名为:模型对照组、西药对照组、茯苓-泽泻低剂量组、中剂量组及高剂量组，除模型对照组不给药外，其它各组给予相应药物干预7周，记录各组ApoE-/-小鼠的体重、进食饲料和饮水，给药完成7周后，称重，眼眶取血检测血脂四项(TC、TG、LDL-C、HDL-C)。
(二)对药“茯苓-泽泻”调节脂质作用机制的研究
将正常对照组、模型对照组、西药对照组、茯苓-泽泻低剂量组、中剂量组及高剂量组ApoE-/-小鼠取肾组织和肝组织进行检测，。肾组织的N0生化指标，肾组织检测AQP2和iNOS在Q-PCR层面的表达，肝组织检测AQP8、SREBP-2、HMGCR和AQP9在Q-PCR层面的表达，选取三种水通道蛋白AQP2、AQP8和AQP9在Western-Blot(WB)层面的表达，从水通道蛋白方面揭示对药茯苓-泽泻对高脂血症痰浊证脂质调节作用的机制。
结果：
(一)模型复制与评价结果
将ApoE-/-小鼠造模4周后，检测血脂四项，模型组的TC值、TG值和LDL-C值升高，与正常对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.01)，模型组的HDL-C值降低，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P＜O.05)，符合混合型高脂血症实验动物模型的标准，结果提示复制高脂血症痰浊证病症结合动物模型成功。
以TC值将模型组ApoE-/-小鼠随机分为模型对照组、西药对照组、茯苓-泽泻低剂量组、中剂量组和高剂量组，各TC值比较，差异均无统计学意义(P＞O.05)，提示用药干预前各组分配无差异，基线具有可比性。
(二)对药“茯苓-泽泻”干预后血脂四项检测结果比较
给药7周后，①TC值水平:西药对照组、茯苓-泽泻中剂量组、高剂量组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.05):中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05)。②TG值水平:西药对照组、茯苓-泽泻中剂量组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05);中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。③LDL-C值水平:西药对照组、茯苓-泽泻低剂量组、中剂量组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.05)，中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05);④HDL-C值水平:相对于模型对照组，随着中药剂量越高，HDL-C值降低的趋势越来越明显。
以上结果提示:茯苓-泽泻低剂量组(LDL-C)和高剂量组(TC)降低胆固醇功能动物实验结果阳性，茯苓-泽泻中剂量组(TC、TG、LDL-C)降低血脂效果最佳，其效应与西药对照组大致相当。
(三)水通道蛋白和脂代谢相关指标结果
1.肾组织中水通道蛋白调节和脂代谢相关指标结果
①AQP2含量:各给药组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.01)；茯苓-泽泻低剂量、中剂量与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05)。②iNOS含量:茯苓-泽泻低剂量、高剂量组、西药对照组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.05):中药各剂量组与西药对照组比较，差异无统计学意义(P＞O.05)。③N0含量:各给药组(除了茯苓-泽泻低剂量组)相对于模型对照组均有下调趋势;④AQP2蛋白水平:各给药组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(P＜O.05)，中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。
2.肝组织中水通道蛋白调节和脂代谢相关指标结果①AQP8含量:茯苓-泽泻低剂量组、高剂量组与模型对照组比较，差异均有统计学意义(/2＜0.05);茯苓-泽泻中剂量组、高剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05)。②AQP9含量:茯苓-泽泻高剂量组与模型对照组比较，差异有统计学意义(P＜O.05);中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。③SREBP-2含量:茯苓-泽泻高剂量组与模型对照组比较，差异有统计学意义(P＜O.05)，中药各剂量组与西药对照组比较，差异均无统计学意义(P＞O.05):HMGCR含量:各给药组相对于模型对照组均具有上升趋势。AQP8和AQP9蛋白水平:肝组织AQP8和AQP9蛋白表达水平均无明显差异，结果提示其表达具有上调趋势。
结论：
(1)成功复制高脂血症痰浊证动物模型:ApoE-/-小鼠经过4周高脂饲料喂养后，检测血脂四项，符合混合型高脂血症痰浊证实验动物模型的标准，提示模型建立成功，为后面开展相关研究奠定基础。
(2)对药茯苓-泽泻具有降脂效应。
将模型组ApoE-/-小鼠再分配5组，给药7周后，提示茯苓-泽泻中剂量组降低血脂效果最佳，其效应与西药对照组(阿托伐他汀钙片)相当。
(3)茯苓-泽泻降脂的作用机制
通过网络药理学结合文献研究，对药“茯苓-泽泻”对水通道蛋白相应指标的影响，结果提示其降脂机制是通过抑制肾脏iNOS基因表达，进而抑制AQP2基因与蛋白表达，代偿性提升肝组织AQP8、AQP9和SREBP-2的表达，其作用机制可能抑制水通道蛋白的表达，增加利尿而达到降脂效应，与茯苓-泽泻具有利水作用有关。