猪苓栽培技术及人工菌核分化研究

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猪苓[Polyporus umbellatus(Pers.)Fries.]是一种食药用真菌,子实体为其食用部位,菌核为其药用部位。猪苓菌核具有利水渗湿、抗肿瘤、加强机体免疫力、抗氧化等作用。随着猪苓药理作用研究的深入,猪苓的需求量持续上涨,导致其野生资源开发过度,濒临灭绝。目前,猪苓生产上普遍采用野生菌核作种进行半野生栽培,一个生长周期需要4~5年,且存在种性不均一、种质退化及产量不稳定等问题。有关猪苓纯菌种栽培试验虽有报道,但尚未见大面积推广。虽可在实验室培育出猪苓菌核,但猪苓菌核分化的条件尚未明确。本研究在实验室前期研究的基础上,完善猪苓人工半野生栽培技术,探究猪苓纯菌种栽培技术,优化猪苓栽培体系;同时研究草酸、土壤真菌及过氧化氢与猪苓菌核分化的关系,从菌核的氧胁迫理论来研究猪苓菌核分化,寻找适宜猪苓菌核分化的条件,以期为猪苓菌核工厂化生产提供理论依据。主要研究结果如下:(1)猪苓人工半野生栽培中,采收年限应不低于三年,最佳种植密度为300 g/窝,蜜环菌用量以2250 g/窝为宜;Zn SO4·7H2O添加量以15 g/窝为宜;Cu SO4·5H2O添加量以5 g/窝为宜,KH2PO4添加量以10 g/窝为宜;采用0.1%KH2PO4浸泡木棒的栽培措施有利于猪苓质量的提高;腐殖酸不利于猪苓生长。采用猪苓袋料菌丝及袋料菌核直接进行大田栽培,目前试验条件下未形成新的猪苓菌核。(2)平板培养中,培养基的酸碱度对猪苓菌丝的生长发育具有较大影响。试验范围内,p H为6.0时有利于猪苓菌丝生长,p H为5.0时则有利于猪苓菌核分化。p H相同时,草酸处理组的菌丝过氧化氢(H2O2)含量显著高于盐酸处理组,且草酸与盐酸相比更有利于猪苓菌核分化,说明过氧化氢与猪苓菌核分化有关。同种酸条件下,p H不同对猪苓菌核分化具有一定影响,且猪苓菌丝的H2O2含量及过氧化氢酶(CAT)活性与p H呈负相关,说明猪苓菌丝内源H2O2与猪苓菌核分化有关。(3)平板培养中,不同土壤真菌发酵液对猪苓菌丝生长发育有一定影响。试验范围内,低浓度(10 m L/100 m L)的菌株M1及菌株M4发酵液可促进猪苓菌丝生长,三种试验浓度的菌株M2及菌株M3发酵液均抑制猪苓菌丝生长。菌株M1及菌株M4发酵液有利于猪苓菌核分化。真菌的种类及其发酵液浓度均会影响猪苓菌丝的H2O2含量及CAT活性。低浓度(10 m L/100 m L)的菌株M1发酵液处理猪苓菌丝,可提高猪苓菌丝的H2O2含量及CAT活性。(4)平板培养中,外源添加过氧化氢(H2O2)及过氧化氢酶抑制剂(1,3-氨基-1,2,4-三唑,AT)均可增加猪苓菌核数目。试验范围内,最适宜猪苓菌核分化的H2O2浓度为10-4 mol·L-1,最适宜猪苓菌丝生长的H2O2浓度为10-6 mol·L-1。外源添加AT会抑制猪苓菌丝的生长,但有利于猪苓菌核分化,最适宜猪苓菌核分化的AT浓度为10-3mol·L-1。猪苓菌丝的H2O2含量与培养基H2O2浓度及AT浓度呈正相关。猪苓菌丝生长(UD)阶段的H2O2含量和CAT活性高于猪苓菌核形成(SI)阶段。
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