一种苔藓植物—泛生墙藓(Tortula muralis)的组织培养与应用研究及空间搭载麻疯树(Jatropha curcas)株系的分子标记研究

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第一部分 苔藓植物是系统进化中较为特殊的类群,随着苔藓植物研究领域的扩大及对其应用价值认识的深入,大量相同时相的苔藓材料的缺乏成为了研究和应用的制约,组织培养技术正是在较短时间内提供大量的便于研究和应用的纯化样品的最好选择。本文针对一种苔藓植物——泛生墙藓(Tortula muralis)进行组织培养,并对其发育过程,如孢子萌发、原丝体发育类型、愈伤组织分化等方面展开一些基础观察研究。一方面可以保种、扩大培养同时相材料,为将来开展苔藓植物系统进化、性别决定、遗传学、细胞工程应用积累资料,满足进一步实验研究和开发利用的需要。本项研究取得的成果如下:1.苔藓材料用2%的氯化汞消毒2分钟效果最佳。2.泛生墙藓孢子萌发和原丝体发育类型属于典型的真藓型孢子萌发型(Bryum-type)。3.利用添加3.0mg/L的6-BA的改良的MS培养基(含2%的蔗糖和0.55%琼脂,硅酸钠2.0g/L,pH=5.8,)可诱导泛生墙藓原丝体分化为愈伤组织。而添加2.0mg/L的2,4-D,不含6-BA的相同培养基可以保持泛生墙藓原丝体生长而不分化。4.利用添加1.0mg/L 2,4-D,1.0mg/L 6-BA的改良MS培养基可以连续传代培养泛生墙藓愈伤组织。5.分别用水、乙醇、乙酸乙酯提取泛生墙藓愈伤组织有效成分,分别进行细胞毒性实验表明,水提取物在0.15U/ml对Hela及HaCat细胞有明显的促进生长作用。可能在皮肤损伤修复方面具有潜在的应用价值。 第二部分 本文针对经空间搭载的麻疯树(Jatropha curcas)7个株系进行RAPD及荧光AFLP分析,检测这些株系是否发生基因突变,并探索一种简单的方法,设计新引物作为各株系的特征分子标记。麻疯树种子经卫星搭载飞行,回收种子后,采用RAPD及荧光AFLP方法对其中7个组培扩繁获得的株系及亲本对照材料进行多态性分析。本实验发现在100对RAPD引物中有8个引物可在搭载株系和对照株系中产生稳定多态性,64对AFLP选择性扩增引物在亲本和搭载株系以及搭载株系之间均产生丰富多态性,其中选取的3对引物检测到663条多态性条带,多态性百分比为100%,表明空间环境可引起植物的确使得麻疯树发生了遗传物质DNA水平上的多点变异,不同个体变异程度不同,并且具有变异频率高,变异幅度大的特点,的确可以为新品种的选育提供大量材料。这3对具有良好多态性的引物,可以使得搭载株系与亲本都具有不同的特征指纹图谱。通过对随机引物S91在2号株系中筛选出的特异性扩增产物进行克隆测序,尝试通过将其作为一端,另一端用所得测序结果的中间序列作为另外一侧引物进行扩增,获得了2号搭载株系新的稳定的RAPD转换特征分子标记。这种新尝试的分子标记方法简单、可靠,未见前人报道,将来进行更多验证后可用于其它RAPD转换分子标记,为特定株系的鉴定工作提供一种新型的简单试验条件下的检测方法。
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