【摘 要】
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人生长激素(human Growth Hormone)是由脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的单一肽链蛋白质激素,由191个氨基酸组成,具有广泛的生理功能,人类的生长激素主要通过刺激肝脏分泌胰岛素样
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人生长激素(human Growth Hormone)是由脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的单一肽链蛋白质激素,由191个氨基酸组成,具有广泛的生理功能,人类的生长激素主要通过刺激肝脏分泌胰岛素样生长因子(IGF-I),作用于骨和软骨,引起身高的增长,同时能够促进人体蛋白质合成及脂肪分解,调节体内水盐平衡。近年来由于杂交瘤技术的发展以及ELISA检测方法的改进,为建立更好的人血清中生长激素的ELISA检测技术提供了可能。ELISA检测法由于具有特异性好、灵敏度高、检测速度快、检测成本较低、无放射性污染等优点,受到人们的普遍关注。有效的ELISA检测方法的建立,在临床上为生长激素的检测提供了重要参考,进而为生长激素分泌紊乱的病人提供重要的诊断依据,对利用生长激素进行替代治疗的病人能更好地实行监测。本研究主要采用人生长激素对小鼠进行免疫,取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,筛选杂交瘤细胞,制备hGH的单克隆抗体,经筛选获得了两株单克隆抗体,分别命名为3E11、2G9,并进行效价测定、抗体亚类分析、电泳、Western blotting鉴定,两株单抗的效价较高,纯度较高,特异性好。本研究建立的双抗体夹心ELISA法采用一株抗hGH的单抗3E11作为包被抗体,以识别和结合待检测标本中的hGH,以HRP-2G9作为酶标抗体,实现对hGH的检测。并确定了包被抗体、酶标抗体的工作浓度以及工作条件,根据标准品的OD190,值绘制出标准曲线,成功建立了双抗体夹心ELISA检测法。检测范围为0.25-20n//ml,灵敏度为0.2 ng//ml,浓度对数与其OD190,值线性关系良好,经方法学检验,此方法平均回收率为98.06%,批内差异为6.56%-8.7%,批间差异为7.13%-9.25%,重复性好,精确度高。有望通过进一步的临床试验开发成为生长激素检测试剂盒。
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