论文部分内容阅读
枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)属蔷薇科枇杷属植物，为原产我国的亚热带常绿果树。类胡萝卜素是枇杷果实中的主要色素，其含量与组成既是决定枇杷果实外观品质的主要因素，也是衡量枇杷内在品质的重要指标。本研究以‘早钟6号’和‘白玉’作为黄肉和白肉两类枇杷的代表品种，主要测定了果实不同发育阶段果皮和果肉的类胡萝卜素积累变化规律，并对其生物合成相关基因进行了克隆与表达分析，主要结果如下： (1)随着果实发育成熟，‘早钟6号’和‘白玉’果皮及果肉中的叶绿素a和叶绿素b含量快速下降；‘早钟6号’果皮和果肉的β-胡萝卜、素含量逐渐增加，‘白玉’果皮中的含量也呈增加趋势，但果肉中含量略有下降；两个品种果皮果肉的β-隐黄质含量均持续增加；‘早钟6号’果皮和‘白玉’果皮果肉中的叶黄质含量减少，而‘早钟6号’果肉中的含量却增加。 在成熟果实中，‘早钟6号’果皮果肉和‘白玉’果皮的类胡萝卜素均以β-胡萝卜素为主，而‘白玉’果肉则以叶黄质为主；且‘早钟6号’果皮和果肉中的β-胡萝卜素含量分别高于‘白玉’果皮和果肉，推测β-胡萝卜素含量的高低是造成这两种枇杷果实类胡萝卜素总量积累差异的主要原因，也是影响这两个品种果实色泽不同的主要因素。 (2)枇杷果皮和果肉裂解前用70％丙酮和80%乙醇分别进行预处理，再结合CTAB-LiCl法提取，可获得质量较好的总RNA，且得率较高。 (3)分离克隆了枇杷果实类胡萝卜素生物合成代谢途径主链上的8个主要基因，分别为EjDXS、EjDXR、EjIDI、EjPSY、EjLCYb、EjLCYe、EjBCH、EjECH。其中EjDXR和EjLCYb获得了cDNA全长。这8个基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与其它物种都具有较高的同源性。 (4)以actin为内参基因，分析了类胡萝卜素生物合成相关基因DXS、DXR、IDI、PSY、LCYb、LCYe、PDS、ZDS、CRTISO、CYCB、BCH、ECH、ZEP、VDE和CCD在‘早钟6号’和‘白玉’果实不同发育阶段果皮果肉的表达特征，结果表明：‘早钟6号’和‘白玉’不同发育阶段类胡萝卜素的积累主要受PSY、LCYb、LCYe、CYCB、BCH、ECH和CCD等多种基因的共同调控；DXS、DXR、PDS、ZDS和CRTISO可能对枇杷果实类胡萝卜素的积累没有限制作用；IDI、ZEP和VDE对枇杷果实类胡萝卜素积累的影响，有待进一步的研究。