缺失pk-1基因的杆状病毒AcMNPV的感染性研究

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杆状病毒是一类环状双链DNA病毒,其作为一种安全的生物杀虫剂以及外源蛋白的高效表达载体,已经在世界范围内得到了广泛的应用。这些应用为研究杆状病毒感染的分子机理提供了契机。AcMNPV的全基因组序列的测定,为单个基因功能研究的广泛开展提供了基础。AcMNPV的pk-1基因是杆状病毒的蛋白激酶基因,但其功能还不清楚。本文对AcMNPV的pk-1基因的功能进行了研究,共包括四章。   第一章对杆状病毒的研究做了综述性介绍,包括杆状病毒的分类、复制周期、基因组组成、杆状病毒的应用、pk-1基因的背景知识以及本实验的研究目的和研究意义。   第二章介绍了本文中应用的所有材料和方法。   第三章介绍了本实验研究的结果和分析,分三小节对研究结果进行了阐述的分析:第一节在含有AcMNPVbacmid的大肠杆菌中,利用λ-RED重组系统,构建了缺失pk-1基因的重组AcMNPV bacmid;第二节利用Bac-to-Bac系统,构建了含有gfp基因的重组病毒;第三节转染和感染。三种不同DNA转染细胞都产生荧光,收集转染细胞的上清,离心感染正常细胞,结果显示敲除了pk-1基因的bacmid转染细胞收集的上清不能正常感染健康细胞,细胞观察不到绿色荧光,对照组野生型和回复突变型都能正常感染并产生绿色荧光蛋白。这表明pk-1基因是AcMNPV复制的必需基因,在感染过程中起重要作用。   第四章进行了总结和讨论。
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