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乙型肝炎病毒(Hepatitis Bvirus, HBV)导致的慢性感染已经成为威胁全球健康的主要问题之一。传统的治疗乙肝药物如核苷类似物以及干扰素在临床上都存在一定的局限性，因此寻找新的抗乙肝病毒药物已成为当务之急。目前，siRNA等核酸类药物以其较强的特异性和高效性被广泛应用于抗HBV的研究中，使慢性HBV感染疾病的治疗出现转机。但是近几年有关乙肝的研究中所用的化学合成、体外转录、质粒载体介导表达的siRNA,都要借助于物理方法和细胞转染手段才能将其导入细胞，限制了其干扰效率。作为一种高效的转导体系，慢病毒载体系统使RNAi的应用不仅仅局限于理论研究，更重要的是使RNAi在临床治疗的应用上有了重大突破。
本研究首先采用真核表达载体pSuper初步评价了针对HBV不同保守区域的shRNAs的干扰效果。结果显示：针对HBV两大保守区DR1区(1826nt-1845nt)和CP区(1775nt-1795nt)的shRNA都表现出了较强的干扰效果。接着，我们采用慢病毒载体系统对以上干扰靶点对HBV复制和表达的影响做进一步的详细评价。一系列的实验结果都表明针对HBV DR1区和CP区的shRNA对HBV的复制和表达的抑制作用最强：HBsAg、HBeAg以及胞内的核心蛋白的表达量都显著下降，HBV的mRNA含量也有不同程度的降低，此外，Southern blot结果显示HBV的复制中间体如RC-DNA、ssDNA的水平都明显下降。最后，我们将干扰效果最强的靶点应用到四环素类似物强力霉素(DOX)诱导的慢病毒载体系统中，进一步研究药物诱导下的慢病毒载体介导的RNAi对HBV复制和表达的影响。研究结果表明：在极低浓度的DOX(5μg/ml)存在的条件下，慢病毒介导的shRNA表达载体(LV-HBV-shRNA)对HBV复制和表达表现出了强烈的抑制作用；而一旦去除DOX，相同条件下的慢病毒载体却对HBV的复制和表达没有任何影响。我们的研究表明：HBV的一些顺式调控元件，例如DR1区和CP区，对HBV的复制和表达都是至关重要的，一旦被干扰掉，就会直接导致HBV复制周期的中断；同时，本课题利用DOX开关调控下的慢病毒载体介导的针对HBV保守位点的RNAi研究，为探索RNA药代学、毒理学以及HBV复制和致病的关系提供了一个新颖的技术平台。