论文部分内容阅读
目的：探讨中药QHF复方对裸鼠肝癌移植瘤上皮间质转化（EMT）的影响与HGF/c-Met信号通路的关系并评价该复方对裸鼠腋下移植瘤生长的影响。 方法：1、第一部分：（1）取对数生长期的HCCLM3细胞，接种于裸鼠右侧腋窝皮下，建立裸鼠皮下移植瘤模型。将60只裸鼠随机分成正常组、模型组、QHF组，DDP组（顺铂组），PHA组（c-Met抑制剂组）。正常组和对照组每天给予0.2ml生理盐水灌胃，QHF组每天给予中药QHF复方0.2ml（华蟾素：8mg，人参皂苷Rg3：0.14mg，三七总皂苷：0.055mg，香菇多糖：1mg）灌胃，DDP组给予DDP注射液0.2ml（1mg/ml）腹腔注射一周两次，抑制剂组给予PHA注射液0.2ml（按25mg/kg）腹腔注射，隔日注射；（2）以裸鼠在给药期间的生长状况和体重变化为指标观察各组药物对皮下移植瘤裸鼠生长状况的影响；以肿瘤体积、肿瘤质量和抑瘤率为指标评价各组药物对裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用；（3）Western-blot检测裸鼠肿瘤组织中HGF、c-Met、p-c-Met、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin等蛋白的表达情况；(4) HE染色观察肺转移情况。2、第二部分：（1）采用基因转染技术构建HepG2稳转细胞株，将搭载目的基因c-Met的HepG2细胞接种裸鼠右侧腋窝皮下，建立裸鼠皮下移植瘤模型。将30只裸鼠随机分成模型组（转染目的基因c-Met），QHF组，PHA组（c-Met抑制剂组）。模型组每天给予0.2ml生理盐水灌胃，QHF组每天给予中药QHF复方0.2ml（华蟾素：8mg，人参皂苷Rg3：0.14mg，三七总皂苷：0.055mg，香菇多糖：1mg）灌胃，抑制剂组给予PHA注射液0.2ml（按25mg/kg）腹腔注射，隔日注射；（2）Western-blot检测裸鼠肿瘤组织中HGF、c-Met、p-c-Met、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin等蛋白的表达情况。 结果：第一部分：(1) QHF组、DDP组、PHA组（c-Met抑制剂组）的瘤体质量均较模型组明显降低（0.88±0.18、0.25±0.03、0.75±0.22vs2.16±0.35，P﹤0.05），抑瘤率分别为59.43%，88.68%，65.57%。（2）与模型组相比，QHF组、DDP组、抑制剂组的肺转移灶数减少（P﹤0.05）。（3）Western-blot检测结果显示QHF组、DDP组、抑制剂组裸鼠皮下移植瘤组织中的HGF、p-c-Met、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达均较模型组降低，c-Met蛋白总量基本不变，E-cadherin的表达量增高。第二部分：（1）成功构建含有目的基因c-Met的稳转细胞株HepG2，并且建立裸鼠皮下移植瘤模型。（2） Western-blot检测结果显示QHF组、抑制剂组裸鼠皮下移植瘤组织中的HGF、p-c-Met、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达均较模型组降低，c-Met蛋白总量基本不变，E-cadherin的表达量增高。 结论：（1）中药QHF复方能够抑制人高转移肝癌HCCLM3细胞裸鼠腋下移植瘤的生长，减少肺部的转移灶数；（2）中药QHF复方能够改善EMT；（3）中药QHF复方可能是通过下调HGF的表达，抑制c-Met磷酸化，阻断HGF/c-Met信号通路的传导，发挥改善肿瘤细胞发生EMT的作用。