论文部分内容阅读
目的:在衰老过程中，炎症反应和促炎反应(Proinflamation)随衰老的发展而增高。慢性炎症也被认为是一个与衰老相关的潜在危险因素。抑制炎症被认为是延缓衰老的重要因素。热量限制，作为目前已知的最有效的抗衰手段，已经被证明可以改善机体炎症水平，有效延缓衰老。但是热量限食在衰老肾脏中的抗炎作用机制还未可知。TLR4/NFκB是经典的触发炎症反应的信号通路，本实验研究了热量限制在该炎症信号通路中发挥作用的机制，为了解热量限制减轻肾脏衰老的作用机制提供了实验依据，也为临床抗衰老提供新的可能靶点。 方法: F344大鼠以3.42kcal/g的标准饮食饲喂至16月龄随机分成两组:热量限制组(CR)和自由饮食组(AL)。热量限食被设定为摄入自由饮食组摄入热量的60％。在24月龄的时候，大鼠被统一处死并且获取标本。血、尿等标本送检常规检测和生化检测，肾脏PAS染色以后进行了组织病理学评分。为了研究信号通路相关蛋白，用蛋白免疫印迹的方法分别检测了Toll样受体4(TLR4)、单Ig区IL-1相关受体(SIGIRR)、髓样分化因子MyD88、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、白介素1受体相关激酶4(IRAK4)和IKβα，磷酸化-NF-κB p65等指标，又用免疫荧光和免疫组化的方法进行了定位分析。 结果: 1)与自由饮食组相比，热量限制能显著降低老年F344大鼠的体重、肾重。另外，两组之间的代谢参数指标显示，在血糖、血尿素氮、总蛋白、血清白蛋白、甘油三酯、尿蛋白/尿肌酐比值的参数中，热量限制组F344大鼠明显低于对照组，然而，在8个月的干预期间两组之间血肌酐、胆固醇无显著性差异。 2)肾脏病理评分显示，热量限制能减轻包括细胞增殖、白细胞浸润、血管内皮增厚，血栓形成在内的肾小球损伤和包括间质炎细胞浸润、肾小管上皮细胞变性、肾小管萎缩、及间质纤维化在内的肾小管损伤。 3)蛋白免疫印迹显示，热量限制组能提高TLR4的表达。 4)蛋白免疫印迹显示，热量限制组能过表达SIGIRR并且能抑制TLR4下游接头分子MyD88、IRAK4和TRAF6的表达。 5)热量限制组炎症相关的指标，Ikβα与磷酸化-NF-κB p65的表达较自由饮食组降低。 结论:热量限食可以减轻衰老造成的肾小球和肾小管损伤，并且能够改善相关的代谢指标。此外，热量限制可以通过诱使SIGIRR的过表达阻断TLR4/NF-κB的信号通路，从而降低下游炎症因子的表达，减缓肾脏炎性衰老。因此，本实验研究表明，SIGIRR可能是热量限制发挥抗衰老作用的重要分子之一，并且其可以作为减缓炎症，延缓衰老可能的新靶点。