【摘 要】
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本文结合免疫分析高灵敏和高效率的分析要求，分别尝试了在新型荧光纳米晶表面和自组装超薄膜微图像表面进行蛋白质的连接工作。 第一部分建立了牛血清白蛋白(BSA)和兔抗牛
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本文结合免疫分析高灵敏和高效率的分析要求，分别尝试了在新型荧光纳米晶表面和自组装超薄膜微图像表面进行蛋白质的连接工作。
第一部分建立了牛血清白蛋白(BSA)和兔抗牛血清白蛋白多克隆抗体(α-BSAPcAb)与Eu：YVO4新型纳米晶的偶联方法并进行了初步的免疫分析。Eu：YVO4纳米晶平均直径15nm，表面被含磷聚丙烯酸修饰。利用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠(sulfo-NHS)作为偶联剂，通过控制偶联介质、反应温度、分离方法等实验条件，分别得到BSA及其抗体与纳米晶的偶联产物。透射电镜测试表明，偶联产物的单分散性很好。荧光测量结果显示，偶联产物的荧光光谱和荧光寿命均没有变化。同时通过优化二喹啉甲酸测蛋白质浓度方法(BCAAssay)，结合纳米晶荧光测定了偶联产物的偶联率。实验条件下，单个纳米晶表面分别平均偶联了9个BSA分子和24个抗体分子。琼脂糖凝胶电泳和免疫印迹分析显示，BSA与纳米晶共价结合，并保持免疫活性。利用纳米晶标记BSA，以微孔板为固相载体，分别实现了α-BSAPcAb和BSA的免疫分析。
第二部分为了寻找更加方便实用的蛋白质微阵列方法，我们尝试了在自组装超薄膜微图像表面进行BSA的选择性结合。首先利用重氮树脂和聚丙烯酸进行静电自组装形成超薄膜，光刻显影后，经X光电子能谱(XPS)和扫描电镜(SEM)表征证明得到清晰的精细图案。之后包被BSA，再作荧光标记免疫识别，得到荧光微图像。通过设计一系列荧光对照实验，结合原子力显微镜(AFM)成像，证明BSA选择性地吸附在没有曝光的膜洗掉后露出的硅片基底部分，并对这种选择性进行了解释。
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