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禽戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是鸡的大肝大脾病(Big liver and spleen disease,BLS)或肝炎脾大综合症(Hepatitis-Splenomegaly,HS)的:主要病原。主要引起25-60周龄的蛋鸡和肉种鸡的死淘率升高和产蛋率下降(10-30%),发病鸡通常腹部充血,卵巢退化,肝脏脂肪淀粉样变性,偶有肝脾肿大。该病曾给澳大利亚的养禽业造成了严重的经济损失,而我国也有该病爆发的报道。由于禽HEV没有找到合适有效的体外培养系统,使病毒的分离和定量较为困难,因此,其致病性的实验报道也较少,只能通过活体的增殖。禽HEV含有3个开放阅读框(Open reading frame,ORF),分别为ORF1、ORF2和ORF3,其中ORF2基因编码的衣壳蛋白是病毒的主要结构蛋白,包含主要的抗原表位,因此对该病毒的研究主要集中在ORF2上。本研究通过套氏RT-PCR对疑似感染HEV的病料进行了分子生物学鉴定,并通过人工攻毒试验对其致病性进行系统观察和总结分析。1.不同肉种鸡中aHEV的检测利用商品化抗体ELISA检测试剂盒对山东滨州某肉种鸡场开展的针对HEV的血清学调查结果,我们从禽HEV抗体阳性率较高的鸡舍,收集疑似患有BLS病的禽的肝脏和脾脏。设计和合成了针对aHEV的检测引物,对收集样品中的禽HEV RNA进行RT-PCR检测,最后从山东滨州某肉种鸡场收集的肝脏和脾脏样品中检测到禽HEV ORF2部分序列。扩增序列与已报道的参考序列的同源性为98.4%-100%,将三个毒株分别命名为 HE-1、HE-2、HE-3。2.aHEV致病性研究将含有禽HEV的肝脏和脾脏研磨液经翅静脉攻毒一周龄SPF鸡,对病毒进行增殖,然后用GE方法对病毒悬液进行定量。利用定量的HE-1毒株悬液,通过肌肉注射分别在3周、16周攻毒ROSS 308祖代肉种鸡,共40只。攻毒后每两周收集血清和病死鸡。剖检肝脏和脾脏,同时观察病死鸡只的肝脏和脾脏的肉眼损害以及其病理学变化,且记录肝脏、脾脏与体重的比值。通过对收集的血清样品进行RT-PCR和斑点杂交检测,发现A组空白对照10只鸡养至28周均未死亡,且抗体均为阴性(S/P<0.2),肝重比平均为2.98%,脾重比平均为0.28%,病毒血症均为阴性。B组10只鸡仅在3周龄进行攻毒,养至28周死亡1只,攻毒后在5周、7周分别出现3只抗体阳性(S/P在0.2-0.25),死亡鸡肝重比为3.36%,脾重比为0.36%,死亡鸡在22周、24周出现病毒血症。C组10只鸡仅在16周龄进行攻毒,养至28周死亡9只,攻毒后从第20周起一直至第28周均出现抗体阳性(S/P在0.2-0.58),死亡鸡肝重比平均为7.11%,脾重比平均为1.4%,所有鸡只在从18周起持续出现病毒血症。D组10只鸡在3周龄、16周龄进行两次攻毒,养至28周死亡3只,3周攻毒后5周、7周分别出现1只、4只抗体阳性(S/P在0.21-0.25),16周二次攻毒后,从第18周起一直至第28周均出现抗体阳性(S/P在0.2-0.97),死亡鸡肝重比平均为4.1%,脾重比平均为0.74%,在第20周、22周、24周零星出现病毒血症,24周后病毒血症均为阴性。通过对禽戊型肝炎的致病性研究以及该病毒对实验鸡群的抗体和病毒血症影响分析发现,早期感染HEV后所产生的抗体对再感染有一定的保护作用。3周龄为非易感期,早期攻毒有利于机体产生免疫反应,当机体再次受到HEV感染时,有一定的保护作用。HEV发病具有一定的时限性。早期攻毒一般不容易引起发病致死,16到18周龄攻毒就很容易使机体发病死亡,并表现明显的大肝大脾症状。抗体的产生无法彻底排除病毒血症,病毒血症持续存在。这些实验数据的获得将为分析禽HEV的致病机理奠定新的理论基础。