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随着微生物分子生物学和遗传工程的飞速发展,越来越多的丝状真菌基因组被解析和公布，但是与酵母研究相比,丝状真菌在研究的深度、广度以及研究规模上还有明显的差距。作为丝状真菌的重要工业菌种之一的米曲霉用于食品及食品加工业已有较长的历史，其全基因组测序工作也于2005年完成，对其进行基础生物学研究就显得尤为重要和急迫。现代广泛采用的判定基因生物功能的基本策略之一便是抑制某个基因活性,再检测由此引起的效应，而RNAi正是基于这样的机理，它拥有其他技术难以相比的优势，成为真菌基因功能研究的重要方法之一。在高通量研究基因的功能方面，RNAi技术已经显示出了良好的潜力。本研究首先构建并优化了适合米曲霉niaD300的PEG介导的原生质体转化体系，证明吡啶硫胺素药物的作用浓度为0.1μg/mL时可以有效地筛选转化子，20mM的CsCl能起到降低转化生长背景的作用。构建含有内含子的发夹RNA（Intron-containingHairpinRNA，ihpRNA）干扰载体，该载体带有吡啶硫胺素筛选标记，选取非折叠蛋白调控因子hacA和葡萄糖阻遏因子creA基因为靶基因，中间以淀粉酶内含子VIII隔开，分别构建了hacA基因和creA基因的RNA干扰载体。利用PEG介导的原生质体转化方法，成功将hacA基因和creA基因RNA干扰载体转化至米曲霉niaD300宿主菌中，并通过菌丝PCR快速鉴定、基因组DNA提取及测序等进一步鉴定转化子。随后利用荧光定量PCR检测转化子的靶基因在转录水平的表达变化，实验结果显示，RNA干扰载体转化米曲霉后，靶基因mRNA表达水平均有一定程度的降低。