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目的:考察首乌藤多糖(SWTP)抗氧化活性,并优选SWTP提取纯化工艺,为进一步开发首乌藤药材提供依据。 方法:(1)体外测定SWTP清除Fenton体系产生的羟基自由基(-OH)、邻苯三酚自氧化体系产生的超氧自由基(O2-)的能力;使用超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)测定试剂盒测定SWTP体内抗氧化活性。(2)以多糖得率和含糖量为指标,优选SWTP水提工艺,并对多糖醇沉浓度进行考察。(3)在优选出最佳碱种类的基础上,以NaOH浓度(A)、提取温度(B)、料液比(C)、提取时间(D)为考察因素,确定SWTP碱提工艺的最优条件。(4)在确定适用酶为纤维素酶、料液比为1:10、酶解pH为5.0的基础上,用正交试验的方法优选SWTP酶提工艺。。(5)采用大孔吸附树脂法对SWTP的脱色、除蛋白工艺进行了研究,对树脂脱色和除蛋白的影响因素,如树脂类型、上样浓度、流速、泄露曲线、洗脱体积进行了考察。(6)以无水葡萄糖为对照品,绘制标准曲线,采用紫外分光光度计法研究SWTP含量测定方法。 结果:(1)9mg/mLSWTP对-OH的清除率是51.7％,对O2-的清除率是49.7%,并且其清除能力有一定的剂量依赖性。SWTP可显著提高小鼠血清和肝组织中SOD、GSH-Px活力,并显著降低MDA含量。(2)SWTP最佳水提工艺为:料液比1:10,提取温度100℃,提取时间2h,提取次数3次,醇沉浓度80%。(3)SWTP碱提优选工艺为A2B3C1D2,即药材加15倍量0.2mol/LNaOH溶液,90℃回流提取2次,每次3h。(4)酶解过程优选工艺为:A2B1C1,水提过程优选工艺为:A3B1C1,最后确定优选SWTP酶提工艺为:药材加10倍量水,50℃浸泡30min,冷却后加入药材量3%的纤维素酶并调溶液pH至5.0,于55℃水浴酶解4h,调pH至中性,然后100℃恒温提取2h。(5)研究表明树脂DA-201的脱色、除蛋白效果最好。确定纯化参数为:处理约2.5倍柱床体积的浓度为1080.6mg/mL的SWTP溶液,流速1.0mL/min,洗脱剂用量约8倍柱床体积,测定结果显示多糖保留率为85.42%,脱色率为38.37%,蛋白脱除率为31.84%,可见用DA-201树脂纯化SWTP是可行的。(6)采用苯酚-硫酸法测定总多糖的含量,标准品葡萄糖在20.02-70.07mg/mL范围内线性关系良好,回归方程y=0.0156x+0.0176(r=0.9995)。经方法学考察表明测定方法精密度高,重现性好,样品在2h内稳定,可以作为SWTP含量的测定方法。 结论:抗氧化研究表明SWTP具有良好的抗氧化活性,值得深入研究;所建立的多糖提取工艺以碱提工艺为最优,多糖得率为24%,含糖量为22%,可用于SWTP工业化生产;树脂DA-201用于SWTP脱色脱蛋白效果良好,方法可行。