大豆抗原蛋白β-Conglycinin及其α′-亚基诱发Brown-Norway大鼠过敏反应的机理研究

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本论文通过四个试验,研究了大豆抗原蛋白β-Conglycinin及其α-亚基诱发Brown-Norway (BN)大鼠过敏反应的机理。1)β-Conglycinin及其α’-亚基样品的制备与含量测定。试验制备的大豆抗原蛋白β-Conglycinin样品的纯度>900%,β-Conglycinin α’-亚基的纯度>95%,均具有免疫原性。2)不同水平大豆抗原蛋白β-Conglycinin对大鼠的致敏作用研究。选取48只21日龄断奶的BN雌性大鼠,体重75.6±1.1 g,随机分配到四个处理中。四个处理大鼠均采食以玉米-淀粉-酪蛋白为基础的日粮,三个处理组在试验第0、1、2、14、21 d分别灌喂10、50、100 mg/mL的β-Conglycinin 1 mL,对照组灌喂等剂量的生理盐水,28 d再次激发后屠宰。结果表明,β-Conglyeinin可以诱发大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)、足垫肿胀反应;导致大鼠小肠绒毛上皮细胞局灶性坏死、脱落,固有层淋巴细胞、浆细胞等炎症细胞浸润:同时,大鼠小肠肥大细胞聚集,肥大细胞组胺的释放增多。本试验进一步证实β-Conglycinin在大豆蛋白引起的过敏反应中起着重要作用,并有剂量性依赖效应。3)大豆抗原蛋白β-Conglycinin对致敏大鼠变态反应的调控机制研究。选取24只21日龄断奶的BN雌性大鼠,体重76.2±1.0 g,随机分配到四个处理中。大鼠经肠道灌喂抗原蛋白β-Conglycinin致敏、激发后建立过敏反应模型。三个处理组分别灌喂5、10、20 mg/mL的β-Conglycinin 1 mL,对照组灌喂等剂量的生理盐水。试验结果显示,灌喂β-Conglycinin 10和20 mg的处理组,大鼠生长性能显著下降(P<0.05):IgE水平也显著升高(P<0.01):淋巴细胞刺激指数、淋巴细胞亚群CD4<+>细胞数量、细胞因子(IL-4,IL-5和TNF-α)浓度均显著升高(P<0.01)。体外检测组胺释放率明显升高;大鼠十二指肠和空肠内肥大细胞数量显著升高(P<0.05):空肠组胺浓度升高(P<0.05);肥大细胞脱粒现象明显。这些结果表明,日粮中大豆抗原蛋白β-Conglycinin能够影响大鼠的体液和细胞免疫功能,引发大鼠发生过敏反应,进而影响到大鼠的生长。同时随着剂量递增,这种现象更加明显。4)大豆抗原蛋白β-Conglycinin α-亚基的致敏原性研究。本试验目的是在试验三的基础上,研究大豆抗原蛋白β-Conglycinin α-亚基的致敏原性。选取18只21日龄断奶的BN雌性大鼠,体重75.9±1.0 g,随机分配到三个处理中。两个处理组分别灌喂5 mg/mL和25 mg/mL的β-Conglycinin α-亚基1 mL,对照组灌喂等剂量的生理盐水。试验结果显示,灌喂5 mg和25 mg的β-Conglycinin α’-亚基,大鼠IgE水平显著升高(P<0.01);小肠肥大细胞聚集,脱粒现象明显;腹腔肥大细胞组胺释放率显著升高(P<0.01),肠道内组胺含量上升(p<0.01);小肠绒毛上皮细胞出现局灶性坏死、脱落。表明大豆抗原蛋白β-Conglycinin a’-亚基能够引发大鼠过敏反应,在β-Conglycinin引起的大鼠过敏反应中发挥着重要作用。
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