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VDAC(电压依赖性阴离子通道)是所有真核生物线粒体外膜的一种丰富蛋白，分子量为31KD的蛋白。认为是线粒体上跨膜代谢物的主要通道，越来越多的证据表明VDAC蛋白有其他的功能，如：结合受体或结合细胞骨架和充当大分子蛋白复合物形成的协调点。而且在导致凋亡的瀑布式信息传递通路中起到主要的调节作用。VDAC是一个多基因家族，近年来，在不同的生物有机体中，发现几种通道的亚型，在鼠和人的基因组中均发现三种不同的基因亚型，即VDAC1，VDAC2和VDAC3.而且都是以前两者的表达为主。在植物中，也发现一种以上的通道亚型。目前对线粒体研究较多是它在凋亡过程中的作用。
很多证据表明：线粒体在凋亡中起到很重要的作用，它是通过释放内膜间隙的细胞色素c(cytoc)进入胞浆中。一旦存在于胞浆中的cytoc活化主要凋亡上游分子caspase9，同时与凋亡蛋白酶激活因子1(apoptoticproteaseactivingfactor1，Apaf1)和dATP互相结合组成了凋亡体(apoptosome)。活化的caspase9随后再活化效应分子caspase3。
材料与方法
1.PET-Trx-VDAC2，PET-CKS-VDAC2，PET-12a-VDAC2质粒的构建用Trizol从wistar鼠脑组织中提出总RNA，经RT-PCR扩增出VDAC2基因。回收纯化后的VDAC2基因与PGEM-T-easy载体连接后转化JM109进行蓝白斑筛选、小量扩增及质粒抽提酶切鉴定回收VDAC2的DNA。然后将经过双酶切的PET-Trx，PET-CKS，PET-HIS及PET-12a质粒与VDAC2在T4DNA连接酶作用下进行连接。连接产物经扩增与鉴定后进行测序。
2.VDAC2的表达优化及对比将重组质粒PET-Trx-VDAC2，PET-CKS-VDAC2，转入BL21(DE3)LySs，PET-12a-VDAC2转入BL21(DE3)，经IPTG诱导表达。分别在37℃，30℃，25℃，20℃诱导，浓度梯度按照0.1mmol/L，0.2mmol/L，0.3mmol/L，0.4mmol/L，0.5mmol/L，0.6mmol/L改变，摇菌3小时以上。最佳条件分别为3h和5h。
结果
1.wistar鼠脑组织提取的总RNA电泳后出现28S、18S、5S三条橘黄色带，28S：18S的亮带比约为2：1，5S条带较淡，经盯-PCR扩增出907bp条带和908bp条带，大小与预计相符。
2.PET-Trx，PET-CKS质粒与VDAC2基因经NheI、BamHI双酶切后进行连接，PET-12a和VDAC2经SalI、BamHI双酶切后连接，经测序后证实，结果完全符合预想，并证明VDAC2基因已克隆至PET-Trx，PET-CKS，PET-12a质粒上。2.在30℃条件下诱导重组质粒转化菌进行表达，表达产物主要以包涵体形式出现，PET-CKS出现小量的可溶蛋白表达量随诱导时间的延长而渐增强，诱导第3或第4小时融合蛋白的诱导表达达到最大量。同时按照浓度梯度诱导，结果发现诱导表达的蛋白量没有明显区别。
结论
1.从wistar鼠脑组织中提取总RNA，RT-PCR扩增出VDAC2基因，并将其克隆入原核表达质粒PET-Trx，PET-CKS，PET-12a构建了PET-Trx-VDAC2，PET-CKS-VDAC2重组质粒。
2.通过体外诱导重组质粒表达，并得到最佳诱导条件。首次用带有分子伴侣和信号肽的载体来尝试表达VDAC2，虽表达的蛋白主要以包涵体形式为主，但可超量表达，同时存在部分可溶性蛋白，这是此试验区别于以前试验的主要方面.