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作为泌尿生殖系统最高发的恶性肿瘤,膀胱癌诊断以及监控手段的常规化一直是临床上的一大难题,精确的癌症监控检测比治疗手段的优化有更加重大意义。膀胱癌检测研究的终极目标是建立一种高灵敏度高特异性高稳定性的膀胱癌标志物体外检测体系来代替膀胱镜检。近期,关于恒温扩增的优势已被反复提及。恒温扩增技术是继PCR技术之后发展起来的,一个新型的对于体外核酸进行扩增检测的技术。我们一直致力于将恒温扩增技术应用于膀胱癌多种肿瘤标志物体外检测。本文介绍了一种可以在低浓度下特异性的检测多种膀胱癌肿瘤标志物的手段,不仅做到了对传统蛋白以及核酸检测的优化,并且可以满足临床稳定性。值得一提的是,该方法经过200例临床病人检测,可以有效的区分浸润性非浸润性膀胱癌。主要内容包括:1、详述了将恒温扩增技术的优势应用到蛋白检测领域的方法,该方法首次提出并验证了茎环分子信标通过抑制G-四联体形成来辅助端粒酶扩增,并且,实现了生物学信号到光化学信号的转化。我们在该体系中还利用氧化石墨烯以及限制性核酸切刻酶的优异性质来实现检测信号的放大。该体系的检测灵敏度达到单细胞水平,检测限可以达到0.4 cells/μL。并且经过数十例临床病人的检验,癌症检出率保持在70%左右,假阳性率更是降低到5.3%。2、我们优化了传统的恒温扩增检测miRNA的方法,做到了灵敏度特异性的双重优化。我们在实现生物学信号到光化学信号的转化的同时,在临床应用方面也有了一定的突破,临床稳定性有了很大的提高。在我们的方案中摒弃了传统滚环扩增使用连接酶连接单链成环的步骤,简化了体系的同时,降低了蛋白酶对实验体系的影响。我们同样使用氧化石墨烯以及核酸切刻酶来实现荧光信号的放大。该体系的检测限可以达到1pM,在低含量检测的同时,也确保了特异度的稳定。该体系在临床上经过数十例来自于不同地区、性别、年龄段、肿瘤级别的检测,展现了很好的临床特异性灵敏度,癌症检出率保持在60%左右,并且没有出现假阳性信号。3、我们整合上述两个检测体系的优点并大胆的将其开发成为了一个体系,该体系可以同时在低浓度下特异性的检测两种膀胱癌肿瘤标志物。该体系在做到了痕量肿瘤标志物体外检测的同时,很好的区别了端粒酶蛋白类似物以及单碱基和三碱基错配靶标的筛选,为同族mi RNA的序列同源性检测提供了新思路。临床灵敏度为96.9%(31/32),特异度为81.8%(18/22)。癌症检出率保持在88.6%,假阳性率为5.3%。至关重要的是,该方法经过200例临床病人检测,可以有效的区分浸润性非浸润性膀胱癌。