重组抗菌肽Adenoregulin的表达、纯化及活性研究

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抗菌肽是一类由细胞核糖体合成的具有抗菌作用的多肽的总称,本课题以adenoregulin为研究对象,主要工作包括以下几方面:构建了ADR单拷贝和多拷贝的一系列表达载体,尝试在大肠杆菌系统和甲醇酵母系统表达ADR单拷贝和多拷贝多肽.将能高效表达Trx-ADR融合蛋白的E.coli BL21(DE3)/pET32a-adr的生长及诱导条件进行了优化,培养基组成及诱导剂的加入时机是对其表达量影响最大的因素.融合蛋白经溴化氰裂解以后,采用了两种不同的方式纯化目标多肽,一是通过常规的反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离纯化,这一方法操作繁琐,成本较高,得率不够理想.鉴于RP-HPLC纯化多肽难以满足规模化生产的需要,建立了阴离子交换色谱和高压凝胶色谱结合的分离方法,纯化过程简单高效,易于放大,是对小分子多肽的纯化方法进行的有益的探索.构建了C末端增加了一个谷氨酰胺残基的ADR突变体的大肠杆菌表达系统,纯化产物经肠激酶裂解可将载体蛋白与目标多肽分离,产物经小肽凝胶过滤纯化,可得到纯度为98%的cADR多肽.
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